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标题:【分享帖】秀出你的western转膜条件

fox_79[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白来源：CO COS7 293T
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：80 72 56 52 48 25 18KD
WB用膜类型、孔径：0.45um PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 90V 电流约为230--280mA之间。两张膜串联叠加。
转膜时间：40min
设备：Bio-Rad 法码西亚

我们的转膜液都是新配的，不重复使用。
15%甲醇。如果蛋白比较大的话，可以加大甲醇浓度，提高电压，或者延长时间。

ps： 实验室有人用80V也做过，结果很好。感觉转膜应该是比较好成功的。
有师姐做5KD大小的蛋白，都是半干转过夜，好像是 <5V 3mA 3W左右。结果也很漂亮。
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969[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：人肿瘤细胞
蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白
蛋白分子量：30-60KDa
WB用膜类型、孔径：pall NC膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒流 0.85-1mA/平方厘米膜
转膜时间：60-90 min
转膜设备: 北京六一 半干转

建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成2倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果很好。
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发表于 2013-5-16 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：人肝癌肿瘤细胞
蛋白名称（可保密）：notch
蛋白分子量：60-120KDa
WB用膜类型、孔径：pall NC膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒流 0.3A
转膜时间：-20度冰柜120min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad

建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成10倍或5倍的母液，保持低温是转膜效果的一个保证，这样效果很好。
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 小中大

相关疾病：
神经胶质瘤
蛋白来源：胶质瘤细胞总蛋白和核蛋白
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：18KDa 、36KDa、55KDa、98KDa
WB用膜类型、孔径：NC膜 PALL
转膜方式（恒压、恒流）：0.35 恒流
转膜时间：60 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad mini

转缓液的配制有点讲究。如果蛋白大于一百多，一般加入SDS，时间延长结果会更好些.
由于，目前试验的蛋白就都不大，所以，我们都采用不加SDS的转缓液，跑出来的条带也很整齐、干净。
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vcve[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源大肠癌205
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：92kd,43kd
WB用膜类型、孔径：0.45pvdf
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：90min
转膜设备:湿转,天能

图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
转膜缓冲液用新鲜配制
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summerxx[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：大鼠脑组织
蛋白名称（可保密）：BDNF（28KDa）、Bactin（42KDa）、LaminB（72KDa），以及磷酸化蛋白（保密 43 KDa）
WB用膜类型、孔径：PVDF（0.45）膜
转膜方式（恒压、恒流）：300mA 恒流
转膜时间：60 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad Mini
转膜缓冲液：25％甲醛 觉得这个浓度的甲醛可以有效降低电转的热量，而且使膜对蛋白的吸附效果较好，Marker转到膜上很鲜艳。 用立春红染色效果也很好。
附图：LaminB


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 小中大

蛋白来源：表达产物
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：29KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：0.3 A 恒流
转膜时间：80 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
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owanaka[使用道具]
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 小中大
蛋白来源：cell lysate, culture medium
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：15-50 kD
WB用膜类型、孔径：NC, PVDF, 0.45 um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压, semi-dry
转膜时间：about 2h is ok if the protein is small and the voltage can keep 100 V, if not increase to 3-4h.
转膜设备: Bio-Rad
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：肺脏、肝脏等
蛋白名称（可保密）：actin
蛋白分子量：43kD
WB用膜类型、孔径：NC膜PALL 0.22um
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流 200mA
转膜时间：45~60min
设备名字 Bio-Rad mini
用的santa cruz 分装和整装的都可以。效价一般1：1000-1：3000左右，可稳定较长一段时间。
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any333[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源肺脏
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：19kd,35kd
WB用膜类型、孔径：0.2pvdf
转膜方式（恒压、恒流）：恒流250
转膜时间：150min
转膜设备:湿转 Bio-Rad mini
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