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标题:【分享帖】秀出你的western转膜条件

wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源:大鼠血管
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：140kd
WB用膜类型、孔径：0.45pvdf
转膜方式（恒压、恒流）：恒流，200ma
转膜时间：210min
转膜设备:湿转,北京六一

图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
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bring[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：心肌
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：90kDa，70kDa,12.6kDa
WB用膜类型、孔径：NC
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：70v 240min，120min，60min
转膜设备:伯乐湿转
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one[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：脑
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：16KD 60KD
WB用膜类型、孔径：16的用0.22的PVDF，60的用0.45的NC
转膜方式（恒压、恒流）:20V
转膜时间：16的30min，60的90min
转膜设备:Bio-Rad 半干

建议：好像很不容易转过
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jujuba[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

转膜不是WB的关键吧，条件很宽，做过280KD-15KD多种蛋白，湿转转膜从50V，60V,80V过夜，80V3h，100V2h,120V1.5h，290mA1h等都试过，效果都可以。转膜液浓度高点低点也能转好。保证低温就行。
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lxh031[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：子宫内膜癌组织
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：156.8
WB用膜类型、孔径：NC膜
转膜方式（恒压、恒流）：恒流400mA
转膜时间：90 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
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www.1[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感觉大家的转膜时间普遍偏长，以下是我的：

蛋白来源：真核表达
蛋白名称（可保密）：（多种，30个以上）
蛋白分子量：40-200kD
WB用膜类型、孔径：PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：恒压100V（电流在280mA至350mA之间）
转膜时间：60min（M<100kD）,60-100min (100kD<M<200kD)
转膜设备: 湿转
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：大鼠肾脏
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：130kD
WB用膜类型、孔径：0.45NC膜 PALL
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流 350mA 转膜时间：120min
设备名字 Bio-Rad mini
一抗用的sigma 羊抗大鼠，0.2mL包装的，打折后价格3000多，有些贵哦。
比例调整到1：1500左右条带可，用BSA封闭。但是背景稍高。
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dog002[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白来源：脑组织
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：38KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜，
转膜方式（恒压、恒流）：80v恒压
转膜时间：180min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad mini


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IAM007[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：真核表达
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：约35kD（双亚基）
WB用膜类型、孔径：0.22 um PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：恒流200mA
转膜时间：60min
转膜设备: 湿转Bio-rad,天能，六一

转膜时间其实不需要那么长的，转膜没转上一般原因不在这里，可能是转膜液的原因：有些蛋白SDS可能影响其与膜的结合，还原型电泳因巯基乙醇的原因也可能导致后面的抗体不结合（这是我最近的经验教训），还有一抗的选择很重要，一定要选识别线性表位的抗体，才能用于做WB
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：细菌蛋白
蛋白名称（可保密）：全部的可溶性蛋白
蛋白分子量：11-170KD
WB用膜类型、孔径：0.45 NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流300mA
转膜时间：80min
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