【分享帖】秀出你的western转膜条件 - 经验共享

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标题:【分享帖】秀出你的western转膜条件

birdfish[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：骨肉瘤细胞
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量： 72kDa
WB用膜类型、孔径： PVDF膜(0.45um)
转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒流200mA
转膜时间： 20-30min
转膜设备: Bio-Rad 型号忘了，就是有4个插孔的电泳仪

图片（可选）：
建议改进方向（可选）：低温很重要，新鲜的电转液也很重要。

memory[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
骨肉瘤
蛋白来源：骨肉瘤CELL LINE
蛋白名称（可保密）：Beta actin
蛋白分子量：42kDa
WB用膜类型、孔径：Nitrocellulose Membrane 0.2um Pore Size (Invitrogen)
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压22v
转膜时间：90 min
转膜设备: X-cell Sure Lock Mini-cell (Invitrogen)

图片（可选）：
建议改进方向（可选）：转膜过程冰水浴，保持低温,Transfer Buffer重复使用。

附件

2013-5-16 17:21

53934787.jpg (12 KB)

junjie05[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：肾瘤细胞
蛋白分子量：39kDa
WB用膜类型、孔径：Nitrocellulose Membrane 0.2um Pore Size (Invitrogen)
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100v
转膜时间：50 min

abc816[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：MCF7
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：70kDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜（GE）
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 100伏
转膜时间：60 min
转膜设备: 伯乐小转膜仪

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：pichia 分泌表达
蛋白名称（可保密）：细胞因子等
蛋白分子量：17到30kDa
WB用膜类型、孔径：millipore PVDF 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压：100V
转膜时间：60min

这个条件除了100KDa的预染maker转的不好，剩下的条带都非常清晰。正向前面ycwzq说的，感觉时间不是很重要，只要蛋白别太小或太大，在一个比较宽的时间和电压范围都能转上。当然这些还有一个重要的影响因素就是所用的蛋白转印缓冲液.
所以建议把自己用的转印缓冲液的配方也贴上，便于分析交流.
我先说我的吧，是大师兄师姐的配方，我用了感觉还不错，但是100KDa以上的转的不好。
蛋白转印缓冲液pH8.2:Tris碱1.93g，甘氨酸9g，甲醇200ml，加水定容至1000ml

mimili_901[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：大鼠坐骨神经
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量： 30kDa
WB用膜类型、孔径： PVDF膜(0.2um)
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300mA
转膜时间： 45min
转膜设备: Bio-Rad

图片（可选）：
建议改进方向（可选）：

plaa[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：小鼠胚胎成纤维
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：36KDa、55KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45
转膜方式（恒压、恒流）：0.3A 恒流
转膜时间：60 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad mini

垫子变薄时，可用三层纤维垫，也没问题。

finger[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看到大家的这些贡献还是很受用的，小分子量的蛋白可能相对比较好转一些，大分子量的稍困难，希望大家能多提供一些大分子量蛋白的转膜条件，谢谢！

蛋白来源：小鼠前列腺癌细胞
蛋白名称（可保密）：P53 P21 RAD51 GAPDH
蛋白分子量：53KDa、21KDa、37KDa、36KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45
转膜方式（恒压、恒流）：恒压110v
转膜时间：60 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad mini

vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：HEK293总蛋白
蛋白名称（可保密）：***
蛋白分子量：~200KD
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.2um (用甲醇预先处理)
转膜方式（恒压、恒流）：恒压 25V
转膜时间：过夜 (~16-20hours)
转膜设备:biorad mini

vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：人前列腺癌细胞
蛋白名称（可保密）：***
蛋白分子量：~40KD
WB 用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um (用甲醇预先处理)
转膜方式（恒压、恒流）：恒压 20V, 限制最高电流0.3A
转膜时间：过夜 (~16-20hours)
转膜设备:biorad semi-dry

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