【分享帖】秀出你的western转膜条件 - 经验共享

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标题:【分享帖】秀出你的western转膜条件

okhaha[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：软骨细胞
蛋白名称（可保密）：b-actin
蛋白分子量： 43kd
WB用膜类型、孔径： PVDF膜， 0.45
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流，350mA
转膜时间： 85mins
转膜设备: BIO-rad 转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。
转膜液的配制：（2.92g甘氨酸，5.8gtris,0.375gSDS，200ml甲醇，用双蒸水定容到1L）

bohe221[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：宫颈癌细胞
蛋白名称：保密
蛋白分子量：60kD
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45uM
转膜方式（恒压、恒流）：恒流，按膜的面积来算电流，标准大小的膜-60mA/张
（8.2cm x 6.0cm)
转膜时间：2h
转膜设备:Biorad semi-dry
转膜液的配制：Boston Bioproduct Transfer buffer
+10-20% 甲醇

建议改进方向：
做半干转的时候，三明治上面再压一张滤纸，可以保证压紧，转膜效率稳定。用这个条件做过不少不同分子量的蛋白，最小从15kD，到最大235kD，都可以得到稳定结果。转膜液只用一次，不重复使用。

mickeylin[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：家牛肝细胞
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：30kDa
WB用膜类型、孔径：NC, 6x8cm, 0.45um
转膜设备: Invitrogen 湿转，外层冰水浴冷却
转膜方式（恒压、恒流）：恒流170mA
转膜时间：根据胶的厚度而定，每0.5mm转30min, 1.5mm的超厚预制胶转1.5-2hr
转膜液的配制：10mM碳酸氢钠，3mM碳酸钠，20%甲醇
建议改进方向：已考染的胶脱色后可以用此法转膜，条带稍淡但不影响结果

附件

2013-5-16 17:37

28926297.jpg (9.39 KB)

Ao7[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：组织
蛋白名称（可保密）
蛋白分子量：170KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜（0.45）
转膜方式（恒压、恒流）：300mA 恒流
转膜时间：170 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad

KGZ564[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：E.Coli BL21
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：4kd
WB用膜类型、孔径：PVDF 0.22um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压15v
转膜时间：O/N
转膜设备: Bio-Rad Mini 湿转
转膜液的配制：for 1 L transfer buffer: 200ml Methanol,14.4g Glycine, 3.03g Trizma-base

以上“转膜时间：O/N”是什么意思啊？

popo520[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：细胞裂解液蛋白名称（可保密）：A蛋白分子量：38KuWB用膜类型、孔径：4.5的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转；恒流200mA转膜时间：1h转膜设备:伯乐转膜液的配制：完全按照宝生物材料配方配置！注意PVDF膜使用前用甲醇激活！
图片我就不送上了！大概就是这个条件

moonlight45[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白来源：HepG2细胞
蛋白名称（可保密）：Akt及P-Akt
蛋白分子量：55KDa/56KD
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45孔径
转膜方式（恒压、恒流）：100V 恒压
转膜时间：75 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
图片：

附件

2013-5-16 17:39

88019118.snap.jpg (35.12 KB)

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