小中大
继续讨论。两个问题：
1、封闭液可用Tween 20等非离子型表面活性剂来降低背景和非特异性条带的原因？
看了很多关于WB封闭的资料，均提到了上述现象。除了可能的抗原修复，膜的疏水性吸附封闭，会不会还有竞争性洗脱膜上蛋白的作用呢？
楼上阐述了封闭对膜上的蛋白是一种非特异性的吸附覆盖，从而影响背景和非特异性条带的结果。Tween20这种小分子也能有效吸附覆盖吗？
2、关于免疫组化使用封闭液
战友在前面提到过免疫组化的例子，我没有做过免疫组化，刚好看看了解一下。发现一个和本帖相关的问题，正好大家讨论。
免疫组化中使用的封闭液与WB有些差别，常常使用的是动物血清为封闭成分及抗体稀释液。这里面的原理除了可能的楼上战友所认为的非特异性吸附覆盖作用外，至少还有一种可能性，那就是特异性的结合。
动物的正常血清中往往也含有一些微量的“特异性抗体”，与我们的一抗或二抗特异性相同。这一点至少我在一种小鼠单抗纯化和一种羊血清多抗纯化过程中得到验证。
通俗的讲，正常的动物血清实际上也有一点儿“不正常”。
用这种有一点儿“不正常”的血清作为封闭或抗体稀释液，就完全是有点特异性的竞争结合了。结果就是整个的降低了检测信号值，非特异条带没有了。
说到这儿，不禁对这些封闭的手段怀疑。不是说怀疑它的效果，而是试验的真实性。我们实验的目的就是为了一张好看漂亮的图吗？
为了这个好看的图，为了可以发表文章，就用一些实验手段，想方法来消除这些事实上应该存在的条带，使得试验结果向我们想要的方向进行？
非特异性条带实际上是抗体特异性不够或抗原决定族接近的真实反映。
