蛋白质与蛋白组学

楼主，我一直有一个疑问，请教您一下。在提取蛋白的过程中，虽然低温和偏碱性的裂解液可以很大程度上抑制蛋白酶的活性，但不同组织的蛋白“结实”程度却有很大差别。有一些蛋白，比如左心室组织，即使不加蛋白酶抑制剂，组织量很多，慢慢悠悠整上大半天，提的蛋白也很好；但是另一些组织，比如血管组织，即使加了cocktail，很小心的提，蛋白降解的也会很厉害，丽春红染膜都能看出条带模糊。有时候即使不同组织一起提，所有条件相同，提出来的结果也不同。您认为如何在提取蛋白时，保护这些脆弱组织呢 ？

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低温

我的蛋白上样量是70ug时对照组和实验组区别不明显，那如果我把上样量加大到100ug或者更大的话，对照组和实验组的区别会变明显吗？非常感谢！

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您将对照组样品做个上样量梯度吧，这样您就可以决定上多大的量能够有很好的区分效果

加甘油了么？一般长时间保存最好-70°较好。荧光淬灭快比较可能与您的试剂盒有关，选个好点的试剂盒试下

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没有，用的是5*的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，平时一般都放-20°
发光试剂盒用的是皮尔斯的超敏试剂盒，不过今天把压片版里的保鲜膜换成新的，淬灭现象没有了。

老师您好，我想问一下用质谱检测蛋白质时，基质效应很大，空白中总是有很多干扰，怎么解决这类问题呢？

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基质效应有样品中内源性成分和样品前处理过程中引入的外源性成分。内源性组分包括无机盐、有机盐、或者各种有机化合物（糖类、胺类、尿素、类脂类）和分析目标物的同类物及其代谢物。外源性组分包括处理样品的塑料管中残留的聚合物、离子对试剂、有机酸、缓冲液、SPE柱材料等。所以可以从内源性和外源性两个方向找原因，样品处理过程、流动相的配制、上样管、是否柱子上有污染残留，有时候实验室空气质量也会造成。

你好：
有一种蛋白质，通过软件预测这种蛋白可能是有毒性的，那么它是否具备用原核表达制备单抗的可能？还有就是已知一种蛋白利用免疫共沉淀拉蛋白的时候是否会由于选取的宿主细胞的不同而得到不同的蛋白条带？如果已知一种新蛋白该从那些方面去寻找与该蛋白相互作用的宿主蛋白？一些蛋白的氨基酸位点发生变化对病毒的致病力方面有显著增强作用，那么在蛋白相互作用上是否会有不同的结果呢？

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1. 如果蛋白对于宿主微量致死毒性，那就不能够利用该宿主进行单抗制备；建议更换宿主菌；
如果蛋白对于宿主为累积致死毒性，并且宿主耐受量相对较高，利用该宿主菌进行单抗制备是可行的，只不过可能产量较低。
2. 如果目标蛋白与宿主蛋白不存在融合表达，那选用不同的宿主对于目标蛋白条带应该没有影响。
3. 如果做蛋白相互作用的话，目前最普遍的方法就是酵母双杂。
4. 病毒致病力的增强，表明氨基酸的改变使得具有新结构蛋白的病毒与宿主蛋白结合更稳定或更容易通过蛋白通道侵入宿主细胞，因此推断新蛋白在蛋白相互作用上应该具有不同的表现。