蛋白质与蛋白组学

您好，版主。我现在做唾液淀粉酶糖基化与非糖基化，以WB分离二者。
大致条件如下：
1、电泳：浓缩胶60V、10min左右，分离胶100V、60min左右；
2、转膜：湿转，100mA、2.5h；
3、封闭：5%BSA+TBST(tween-20浓度0.058%)，室温下、床2h；
4、一抗与二抗按说明书稀释。稀释液与清洗液与封闭液配方一样，均为1.33%BSA+TBST(tween-20浓度为0.025%)；
5、ECL发光法。
结果如图，您能不能给分析下，我个人感觉电泳后的环节出问题。上样量足够、电泳分离得蛮好。谢谢噢。

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从图上结果来看，个人感觉除背景有些深和主带有些虚外，其他都还可以。背景深可能是因为一抗孵育完以后洗膜不彻底，主带虚的话可以尝试适当增加一抗孵育时间。如果目的蛋白的分子量过大不建议使用高电流转膜。个人意见，仅供参考。

如果想除去脂类，可以尝试“丙酮沉淀”处理一下样品。

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想就“丙酮沉淀”请教一个问题：有人用丙酮浓缩蛋白质，但又说浓度过低的时候不能用这种方法，因此就有疑问：既然要浓缩，那就是浓度比较低，如果浓度过低不能选择丙酮沉淀，那大概这个度该是多少？或者根本就没这种限制？谢谢

想就“丙酮沉淀”请教一个问题：有人用丙酮浓缩蛋白质，但又说浓度过低的时候不能用这种方法，因此就有疑问：既然要浓缩，那就是浓度比较低，如果浓度过低不能选择丙酮沉淀，那大概这个度该是多少？或者根本就没这种限制？谢谢

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关于这个浓度的话，最好在1mg/ml以上。

如果想除去脂类，可以尝试“丙酮沉淀”处理一下样品。

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您好，请问您那儿有“丙酮沉淀”的相关知识和操作吗？

蛋白质芯片技术的应该越来越广，其中抗体芯片更为成熟，请问目前市面上的抗体芯片有多少种？应用最成熟的是那些？谢谢！

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抗体芯片根据片基不同分为平面微阵列芯片和悬浮液体芯片，平面微阵列芯片代表品牌有Raybiotech、Full moon等，悬浮液体芯片的代表产品有Bio-rad的Bio-plex悬浮芯片系统。

您好，请问您那儿有“丙酮沉淀”的相关知识和操作吗？

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1 样品中加入5倍样品体积的丙酮(-20度预冷后)，-20度过夜；
2 5000g，4度，离心10分钟；弃上清，待样品中丙酮挥发完后加入裂解液溶解。
个人的小小经验，希望对您有帮助！