蛋白质与蛋白组学

"从图上结果来看，个人感觉除背景有些深和主带有些虚外，其他都还可以。背景深可能是因为一抗孵育完以后洗膜不彻底，主带虚的话可以尝试适当增加一抗孵育时间。如果目的蛋白的分子量过大不建议使用高电流转膜。个人意见，仅供参考。"

谢谢版主的建议。我做的目的蛋白分子量分别是57kD和62kD,个人严重怀疑在转膜环节出问题，电转液配置没问题、新鲜，以前用您讲的湿转、低电流100mA、2h，PVDF膜是0.2um，做了DAB结果还不错。那现在准备转膜做回以前的条件，就是低电流100mA、2h，不过想换个0.45um的PVDF膜。那现在请教您，这个膜的选择应该没问题吧？我选择孔径大的膜会不会有渔网拦不住沙子的顾虑？hope 4 ur reply！

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蛋白分子量分别是57kD和62kD 用 0.45um的膜没有问题，不必担心。为保险起见，低电流转膜时间最好延长点好，我个人的习惯是10v 过夜转。

用western blot技术对creb总水平和磷酸化水平检测是否一定要提取核蛋白来进行western blot呢？普通方法提取总蛋白进行检测会对结果有影响吗？

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提取方法应该是根据您的实验目的来确定的，比如说您的目的蛋白非常少，或者是WB杂出来的杂带很多，或者其他原因，那提取核蛋白就比提取总蛋白要好。

您好！我想请教您关于检测蛋白质的乙酰化和甲基化的具体方法，看了文献感觉它的意思是先用一个乙酰化抗体把蛋白质沉淀下来再用该蛋白的抗体对沉淀下来的蛋白进行western检测，但是具体操作还是不懂
谢谢！

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您找些IP/Co-IP 方面 的protocol 或者试剂盒的说明书看下就明白了

"从图上结果来看，个人感觉除背景有些深和主带有些虚外，其他都还可以。背景深可能是因为一抗孵育完以后洗膜不彻底，主带虚的话可以尝试适当增加一抗孵育时间。如果目的蛋白的分子量过大不建议使用高电流转膜。个人意见，仅供参考。"

谢谢版主的建议。我做的目的蛋白分子量分别是57kD和62kD,个人严重怀疑在转膜环节出问题，电转液配置没问题、新鲜，以前用您讲的湿转、低电流100mA、2h，PVDF膜是0.2um，做了DAB结果还不错。那现在准备转膜做回以前的条件，就是低电流100mA、2h，不过想换个0.45um的PVDF膜。那现在请教您，这个膜的选择应该没问题吧？我选择孔径大的膜会不会有渔网拦不住沙子的顾虑？hope 4 ur reply！

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蛋白分子量分别是57kD和62kD 用 0.45um的膜没有问题，不必担心。为保险起见，低电流转膜时间最好延长点好，我个人的习惯是10v 过夜转。

再次感谢版主建议！^_^