【讨论帖】抗菌肽的大规模生产 - 经验共享

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标题:【讨论帖】抗菌肽的大规模生产

二子[使用道具]
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发表于 2013-5-23 14:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

十个氨基酸的能表达吗

kulee[使用道具]
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发表于 2013-5-23 14:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

关于磷酸缓冲液是否会影响PAGE电泳的问题，我个人实验体会认为应该进行脱盐处理的。
据我得实验（抗菌肽表达)来看，浓缩后（从50ml到500ul）磷酸盐缓冲液的确是影响了PAGE胶的效果，脱盐处理后条带清晰。
但我不确认是否所有毕赤酵母表达产物都需要脱盐。请各位战友仅做参考

memory[使用道具]
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发表于 2013-5-23 14:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看来原核和真核都各有优缺点，原核我作过，融合蛋白表达量挺好的，但经过切割，纯化加上抗菌肽易被降解的缘故，基本上纯品就很少了。所以个人觉得融合表达还不是最好的选择，至于酵母我没作过，不知作过的同行，酵母表达量有多高,在纯化方面是否顺利？
也不知市场上用于临床上抗菌肽有哪些?又是如何生产的？

12xunmei[使用道具]
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发表于 2013-5-23 14:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

检测抗菌肽抗体的制备，可以选择抗菌肽上的部分氨基酸序列进行人工合成，然后免疫小鼠获取相应的抗多肽的抗体，然后进行检测．需要的话还可以进行相应单克隆细胞的制备，获得大量的抗多肽的单克隆抗体，不仅可以用于检测，还可以与beads耦联后亲和纯化抗菌肽，解决抗菌肽的纯化检测问题．
不过这可是一大手笔！

lgm[使用道具]
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发表于 2013-5-23 14:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议选择原核串联表达，连接的位点可以选择比较便宜的酶切割位点或酸切割位点，当然这些要考虑你的蛋白序列。
理由一:可以很好解决分子小的问题，以及小分子带来的检测问题
理由二：可以解决酶切成本问题，相对与融合表达来说。
理由三：可以避免真核表达带来的纯化问题，酵母表达这些物质的话，除色素是一个非常麻烦的事。
请LZ考虑，具体文献可以搜索。

nikonun[使用道具]
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发表于 2013-5-23 14:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的课题也是抗菌肽的表达，不过用的是酵母
请问各位前辈，酿酒酵母能表达等电点为12左右的抗菌肽吗？碱性会不会太强呢？产量又如何呢？

bamboo16[使用道具]
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发表于 2013-5-23 14:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

您好，我现在也要做抗菌肽的表达，但是我选择的抗菌肽只有43个氨基酸，在酵母中表达的话，表达量很成问题。
请问，你们表达的都是多大的？

memory[使用道具]
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发表于 2013-5-23 14:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
超敏反应
抗菌肽会产生抗体，会引起过敏反应。没有任何应用前途。相当于给动物打疫苗。怎么做新型抗菌剂去杀菌了。

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