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标题:【求助】如何去掉蛋白提取中的脂肪？

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发表于 2013-5-28 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很好的帖子啊！

同问，我需要提取的组织中含有很多脂肪组织，匀浆前也剔除不掉，很是发愁。

前面大侠们的实验有结果了吗？能否提供点经验哈，先都谢啦！

和弓长张同问“离心过滤管是否是将超声粉碎好后的组织直接放入过滤管中离心？还是将第一次离心好后的上清放入过滤管中离心？离心时间为5min，那

么转速为多少？多次离心会不会使蛋白含量下降？”。

另外，过滤管是0.22um 还是0.45 um的呢？

先多谢啦！
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am10[使用道具]
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发表于 2013-5-28 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
抗体纯化技术（英文版）上有讲如何去除脂类，以前照着做过效果不错，因在外出差，没有办法查找资料在确认，谁有时间可以确认下具体的操作方法

这里大体讲下方法，谁查到文献或者实验确认后可以再告知下：

先在蛋白溶液中加入一定浓度的氯化镁或者氯化钙，搅拌一段时间以后，缓慢加入一定量的硫酸葡聚糖，这时脂类会沉淀下来，最后离心去沉淀，多余

氯化镁，氯化钙，硫酸葡聚糖可以用透析的方法去除，操作相对简单的。具体的浓度记不清楚了
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发表于 2013-5-28 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问 脂肪组织如何提蛋白？需要注意哪些呢？如何去除脂肪呢？
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-5-28 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很好的帖子啊！

同问，我需要提取的组织中含有很多脂肪组织，匀浆前也剔除不掉，很是发愁。

前面大侠们的实验有结果了吗？能否提供点经验哈，先都谢啦！

和弓长张同问“离心过滤管是否是将超声粉碎好后的组织直接放入过滤管中离心？还是将第一次离心好后的上清放入过滤管中离心？离心时间为5min，那么转速为多少？多次离心会不会使蛋白含量下降？”。

另外，过滤管是0.22um 还是0.45 um的呢？

先多谢啦！

====================================================

离心过滤管使用：

样品蛋白加入抽提液后 放入离心机离心 去沉淀留上清

如果还有脂肪等杂质 将上清液加入离心过滤管中 12000rpm 5min

这时得到的滤液就是蛋白液了 损耗很小

如果在滤膜上还有残余的上清液 请延长时间或更换离心过滤管的滤膜

多次离心 蛋白基本没啥损失 但注意控制温度

我用的是0.22的 0.45没用过
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zhihui小新[使用道具]
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发表于 2013-5-28 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在做脂肪细胞，遇到同样的问题。

LILYMILLIE 和弓长张的实验有结果了吗？用的离心过滤管还是针头过滤器？

谢谢！期待中......

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呵呵不好意思，才看到你的关注。我用了过滤管，效果很好，外形有点类似小型质粒提取的吸附管。4摄氏度离心
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2013-5-28 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用硫酸铵沉淀法去除脂类，沉淀下来的蛋白用透析法除掉硫酸铵即可
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2013-5-28 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵不好意思，才看到你的关注。我用了过滤管，效果很好，外形有点类似小型质粒提取的吸附管。4摄氏度离心

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请问下过滤管是不是一般试剂公司就可以买到？你是用0.22的过滤管吗？
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ququer787[使用道具]
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发表于 2013-5-28 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在做脂肪组织的蛋白提取。我用1ml的一次性注射器插到蛋白液体层吸取。也比较方便。还有就是我问下，组织在液氮中研磨，裂解液也是加在液氮里头吗？我试过，但是立刻就形成了冰。
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2013-5-28 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提蛋白一般在冰上操作即可。

离心管法不错，简单易行。Corning公司有。
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