蛋白质与蛋白组学

这一张是磷酸位点的p-mTOR（Ser2448),用的都是CST的抗体，#2971和#2983.反应条件：3.5%的积层胶，8%的分离胶。所用的是5%脱脂奶粉配的封闭及孵抗体液。
1）电泳恒压60V 30min,120V 90min.
2）电转恒流：300mA,尽量保持电压在100V以上。但有时候不到100也可以出结果。我用的Marker最大是170KD,所以切胶的时候估计一下，除尽积层胶和分离胶上面1-2mm的胶，然后切到170KD的位置。
3）封闭1h,室温。
4）一抗4度过夜，按照说明的1：1000的抗体。
5）二抗室温1h.

===========================================================

请问楼主转膜多少时间？你电泳时间这么短，蛋白能跑开吗，用哪套设备跑的呢

把这个帖子顶起来，看看还有没有高人光顾

我今天用DAB染色，上样量１５０ｕｇ的泳道隐隐约约出现了一条条带，提样品用了鸡尾酒，立春红染的也发现了条带（在２００ｋｄａ　ｍａｒｋｅｒ上方一点点），其他上样量比较少的泳道没有看见条带

打算１００ｖ　－２０度转膜过夜，一抗１：５００　三七度　摇床过夜，看看出不出条带

===============================================

－２０度转膜过夜，这个非常创意啊，请教应该怎样操作呢？