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【1】PVDF膜肯定可以用丽春红染色的。我们这里的很多人基本上用 的都是PVDF膜,染膜用的都是丽春红。
【2】我们一般用的都是“碧云天”公司配好的丽春红。哈,我和碧云天可没有关系,不是在做广告,只是我们这里的传统,都是用碧云天的。以前也有人用过自己配制的,效果也可以的。配方和“wenshl2005”战友上面所说的是一样的。下面是丽春红的应用说明。
使用说明:
1.
将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中,摇动3-5分钟或更长时间,直至出现清晰条带。对结果作适当
记录。
2.. 用蒸馏水,PBS或其它适当溶液漂洗2-3次,每次3-5分钟,去除丽春红,进行后续的Western检测。
从使用说明中,我们可以看出,PVDF膜是可以用丽春红染色的。
【3】我的染色方法是:转膜完成后,取出膜在甲醇里泡1分钟,然后在双蒸水中过一下,放入丽春红里染色,室温,摇床上,时间是5-30分钟。然后把染好的膜放到双蒸水中洗一下,不要洗的太久,把表面的丽春红洗掉就可以了。这时就可以看到红色的蛋白条带了。然后把膜放在TBST中,室温,摇床上洗3次,每次10分钟。然后就可以往下做了。
【4】丽春红的染色敏感性和ECL敏感性差的很远呢。也就是说,及时丽春红染色染不出来,ECL 也有可能曝光曝出来的。
【5】感觉丽春红染色效果不是很好的,有时候清楚,有时候也不是很清楚。而且染色后再往下做后面的结果会收到一定的影响。所以,如果熟练了,后面就可以不染色了。也可以上样的时候都上两个孔的样,转膜后把这两个孔对应的膜剪下来染色,如果染上了,说明其他的也会染上的。