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标题:【求助】丽春红染色出事了。。

remenb[使用道具]
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PVDF膜当然可以染了,我们一直这样用的
你说的染红是因办block之膜被牛奶中的蛋白封闭了,丽春红是与蛋白结合的,这样膜就全红了
我用block之后的NC膜染就是这种效果
所以要在刚转完膜染,block之后就不能染了
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DDD[使用道具]
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都曝光过了,就是已经封闭过了,整张膜都是蛋白,当然整个膜都红,也看不见条带。
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idoww[使用道具]
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不要误导别人!!!
封闭的牛奶与转膜的蛋白结合完全不同,所以即使是封闭后,转移的蛋白条带仍然能够用丽春红染色,经过我多次试验证实的!
虽然隐约记得PVDF膜也能用丽春红染色,但因为长时间不用PVDF膜了,不是很确定,希望有人来确证一下。
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viviwang1987[使用道具]
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【1】PVDF膜肯定可以用丽春红染色的。我们这里的很多人基本上用 的都是PVDF膜,染膜用的都是丽春红。

【2】我们一般用的都是“碧云天”公司配好的丽春红。哈,我和碧云天可没有关系,不是在做广告,只是我们这里的传统,都是用碧云天的。以前也有人用过自己配制的,效果也可以的。配方和“wenshl2005”战友上面所说的是一样的。下面是丽春红的应用说明。
使用说明:

1.
将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中,摇动3-5分钟或更长时间,直至出现清晰条带。对结果作适当
记录。

2.. 用蒸馏水,PBS或其它适当溶液漂洗2-3次,每次3-5分钟,去除丽春红,进行后续的Western检测。

从使用说明中,我们可以看出,PVDF膜是可以用丽春红染色的。

【3】我的染色方法是:转膜完成后,取出膜在甲醇里泡1分钟,然后在双蒸水中过一下,放入丽春红里染色,室温,摇床上,时间是5-30分钟。然后把染好的膜放到双蒸水中洗一下,不要洗的太久,把表面的丽春红洗掉就可以了。这时就可以看到红色的蛋白条带了。然后把膜放在TBST中,室温,摇床上洗3次,每次10分钟。然后就可以往下做了。

【4】丽春红的染色敏感性和ECL敏感性差的很远呢。也就是说,及时丽春红染色染不出来,ECL 也有可能曝光曝出来的。

【5】感觉丽春红染色效果不是很好的,有时候清楚,有时候也不是很清楚。而且染色后再往下做后面的结果会收到一定的影响。所以,如果熟练了,后面就可以不染色了。也可以上样的时候都上两个孔的样,转膜后把这两个孔对应的膜剪下来染色,如果染上了,说明其他的也会染上的。
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不要误导别人!
封闭的牛奶与转膜的蛋白结合完全不同,所以即使是封闭后,转移的蛋白条带仍然能够用丽春红染色,经过我多次试验证实的!
虽然隐约记得PVDF膜也能用丽春红染色,但因为长时间不用PVDF膜了,不是很确定,希望有人来确证一下。

您教训的是,我试了一下,nc膜时可以染出条带。
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感谢大家在假期还如此热心指教 ,下面上传一张我做的b-actin的图片,我就是把它染了,感觉蛋白量不是很少啊。 嘿嘿,这张电泳跑的不好就给划了。。。。 尽管大家这么热心的帮忙,我越发的糊涂了,大家的都可以染,我的怎么就不行。。。。反正我从来不染,染出不出来无所谓,就是有点不甘心 哈哈 在此感谢大家的支持


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idoww[使用道具]
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记得听师兄讲过,PVDF膜不能用立春红染,只有NC膜才可以。

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这种说法应该没有根据把,千万不要误导新手们,我就是新手行走很艰难
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idoww[使用道具]
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pvdf膜不能用立春红染
可以用考马斯亮蓝染:和page一样的配方,染5min,脱色到条带清楚,大约10min

===================

考马斯蓝不是用胶的吗
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wood533[使用道具]
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我的是PVDF,可以染的。给你张我染的。


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wood533[使用道具]
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考马斯亮蓝是不可逆的,所以染膜可惜了。
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