【求助】蛋白电泳跑到一半但不不再往下跑了 - 经验共享

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标题:【求助】蛋白电泳跑到一半但不不再往下跑了

小游abc[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果你想跑10k的蛋白，你可以试试看15%的胶怎么样

invitrogen的4-12%的bis-tris预制胶用MES buffer跑，可以很清楚的分离10k以下的蛋白，你也可以试试看用他们的配方来自己配胶和电泳buffer

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我是想跑20kD左右，用了15%的胶，那条线还在，但是跑到10kD marker下面去了，不知道这样影响实验结果吗？我想转膜！谢谢！

小游abc[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近我们跑胶也遇到过一次同样的问题，那次跑胶的时间比较平时长，分离胶10%，后来把电泳时间缩短了，换了12%的胶，结果正常了，很奇快的现象，至今没想明白。

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那缩短什么时间啊？谢谢！

fsdd817[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

前沿那条线我认为就是不在分离范围的小蛋白的集合，只要你的蛋白在那条线后面就没问题

小游abc[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

为什么10kD的可以跑到那条线前面呢？

小游abc[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我去年也碰到过几次，把其中一张传上来给大家看看。我当时要的蛋白在70多KD左右，所以没什么影响，也就无可奈何，过了一段时间后就消失了，我觉得应该不是分离胶浓度大导致孔径问题，因为孔径应该影响的是上面的大分子蛋白才对，本来怀疑会不会是样品的什么原因导致小分子蛋白结合在一起，但对比marker中也受影响出现一条细线，所以还是认为原因还是出在分离胶上，不知道会不会是PH8.8的TRIS-HCl的问题

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PH8.8的Tris-HCl我重新配置的。

ROSE李[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也遇到过最后14KD的带很细，但是最近我把4*分离胶和浓缩胶缓冲液换了新的后又好了

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