【求助】2xSDS上样缓冲液的配方 - 经验共享

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标题:【求助】2xSDS上样缓冲液的配方

am10[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

2xSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液
终浓度
1mol/L Tris-Cl（pH 6.8） 0.5ml 100mmol/l
10%SDS 2ml 4%
甘油 1ml 20%
溴酚兰 0.1g 0.2%
DTT现用现加，因为不含DTT的缓冲液可以室温保存，用时加1mol/lDTT,体积为总体积的1/10,也可以加终浓度10%的巯基乙醇，最好现用现加

standbyme[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

xue258[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

很有帮助的帖子！也想搭车请教几个问题
1、组织提蛋白后什么时候加2*SDS上样缓冲？匀浆时，离心前，还是煮沸变性前？与裂解液或所提上清液等体积加入就能达到所需终浓度吗？
2、如果要测蛋白浓度，该什么时候测？加缓冲液前还是后？变性前还是变性后？
3、所测每个样本浓度有差异，点样前可以用上样缓冲液稀释到浓度一致吗？这样每个样本中的缓冲液终浓度不同对试验结果有什么影响？
还望高手赐教，谢谢！

解答：1、煮沸变性之前加上样缓冲液；如果是2x的缓冲液，是加入与上样样品等体积的缓冲液。
2、测蛋白浓度应该是在蛋白提取之后，每次电泳之前，按照所测蛋白的量确定各样品的稀释倍数。稀释好后，再加入缓冲液，煮沸变性。
3、如各样品浓度有差异，应该用蛋白裂解液或生理盐水等能够溶解蛋白的溶液来稀释。

mimili_901[使用道具]
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发表于 2013-5-30 16:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做的是细胞的一直用的是2xsds配方：共（10ml）

tric-hcl（6.8） 2ml

甘油 2ml

20％的sds 2ml

2-巯基乙醇（dtt或者msp） 1ml

双蒸水 2.5ml
0.1％溴酚蓝 0.5ml

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