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标题:【求助】Western检测TNFa、TGFb的问题

yes4[使用道具]
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发表于 2013-5-30 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

TNFa、TGFb的种属来源是什么啊？？
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flower-201[使用道具]
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发表于 2013-5-30 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的是细胞,用蛋白裂解液提取的蛋白,也是TGFb,一直没有做出来，内参条带很浓，不知是怎么回事
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loli[使用道具]
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发表于 2013-5-30 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼上的你做的细胞什么种属来源的？我要做人的TGF-beta1，但是不不知道蛋白的分子量，请问下怎么查？谢谢
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发表于 2013-5-30 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的是大鼠来源的.我也没查,是师兄以前做过的,说是25KD,我又问了其他人,说有三种形式,单体12.5KD,二聚体25KD,前体是50KD左右.人的可能也差不多吧,具体的你买抗体的说明书上有是哪一种的
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发表于 2013-5-30 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同感啊。
我也是啊，抗体用的也是santa cruz的，而且我都做了差不多10次了，就是做不出TNF alpha，内参和别的抗体做的都还凑合，TNF就是不出，老板逼得我都要跳楼了，他强烈要求我做出来。

哪位达人能救救小弟一把啊？救人一命胜造七级浮屠啊。阿门！！
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PCR[使用道具]
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发表于 2013-5-30 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
忘了，我的一抗都1：50稀释了，二抗都1：100了，我晕，TNF，I服YOU.
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发表于 2013-5-30 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

既然TNF、TGF是分泌蛋白，

对于培养细胞的蛋白， 是否需要试试细胞培养液呢？是否可以使用ELISA代替以提高灵敏度呢？是否需要浓缩，以提高这两种蛋白的浓度？或者需要加入蛋白酶抑制剂？

对于组织提取的蛋白，我没有经验。只能瞎说两句。既然别人用免疫组化能做出来，我想WB也应该能作出来吧。但是这两个蛋白/多肽在你要提取的组织表达丰富吗？
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发表于 2013-5-30 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你是从哪种组织或细胞中提取的蛋白？这2种蛋白的丰度如何？
据我所知，TNFa在某些诱导因素下，才能表达增加，而基础表达可能不高。
你是否可以做一个阳性对照，以检测你的抗体是否有效。
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2013-5-30 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

公司的网页暂时有点问题，我把我们做的TGF beta1传下来，供大家看一下。
我们做了两个，一个是通过表达蛋白做的：ReSRP0050
另一个是合成多肽做的。SRP00793

[ 本帖最后由 fsdd817 于 2013-5-30 17:46 编辑 ]


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发表于 2013-5-30 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
"我要做人的TGF-beta1，但是不不知道蛋白的分子量，请问下怎么查？谢谢"
可以到抗体的公司网站上查，输入TGF-beta1，就可以看到很多种相关抗体，点击抗体，就有抗体的介绍，图片，大小，和推荐的阳性对照。
我的santa cruz抗体可以在其网站上查到。其他的公司还没验证过。

关于akanggg的问题，还有一个解决办法是，检测该公司推荐的阳性对照细胞的TNF，看是不是抗体的问题。
谢谢！
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