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标题:【求助】Western检测TNFa、TGFb的问题

finger[使用道具]
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发表于 2013-5-30 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的pvdf膜，0.22um孔径，转膜湿转60v，60分钟。今天我在想是不是我的炎症组织不够重，tnf表达不高，所以测不出来。抗体我看你用的是sc-1350，这个之前我用过国内分装的，没有做出来。我用的这个sc-1349，我看了说明书，是大鼠来源的，按理说应该更好啊。另外我在想抗体稀释液是不是盐浓度太高，我用TBST稀释抗体，这个不知道会不会有影响，请做过的朋友给点建议。
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发表于 2013-5-30 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 finger 于 2013-5-30 17:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我用的pvdf膜，0.22um孔径，转膜湿转60v，60分钟。今天我在想是不是我的炎症组织不够重，tnf表达不高，所以测不出来。抗体我看你用的是sc-1350，这个之前我用过国内分装的，没有做出来。我用的这个sc-1349，我看了说明书，是大鼠来源的 ...

大鼠来源？鼠抗鼠？应该用羊或者兔来源的吧，然后二抗用抗羊或者抗兔
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2013-5-30 18:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我表达有误，是山羊抗的，二抗是小鼠抗山羊的。我是说在抗体说明书中有这样一句话：source：tnf-a is an affinity purified goat polyclonal antibody raised against a peptide mapping at the C-terminus of TNF-a of rat origin.
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