【求助】HIF-1a的分子量到底是多少？ - 经验共享

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标题:【求助】HIF-1a的分子量到底是多少？

33号[使用道具]
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发表于 2013-5-31 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

似乎在做此指标的战友都做的不是很理想回复一下希望有高人指点啊呵呵

+小生怕怕+[使用道具]
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发表于 2013-5-31 16:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做了几次，都没做出来啊，虽然在胶及转膜后的膜染色，在120KD左右都有很清晰的但是很细的条带，结果就是不出啊

89tongzijun[使用道具]
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发表于 2013-5-31 16:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也做hif-1a，查过几个公司，对于它的分子量也是说法不一，但是文献上大多只说在120kd。我现在也主要检测这个位置的条带，暂时不是太理想。

建议你孵抗体之前裁膜裁的宽一些，因为我们有经验就actin在跑不同浓度的分离胶的时候，它有时就在marker上面，有时就在下面，说不好什么原因。最好不要因为裁的膜过窄把目的条带裁下去了。

ps：你用的哪个公司的抗体啊？

jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2013-5-31 16:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做了几次，基本上都有条带的，在130KD 左右。

summerxx[使用道具]
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发表于 2013-5-31 16:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼上的你好啊我也在做这个指标我做出来目的条带也是在130kd左右
还以为是假的呢都怀疑预染的蛋白marker是不是不准确了
现在知道你也是这种情况就放心多了多多交流

wood533[使用道具]
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发表于 2013-5-31 16:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我后来做的不是条带不出来，就是没有趋势，能否交流下细胞裂解液的配方，电泳，转膜的条件？？谢谢

wsll[使用道具]
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发表于 2013-5-31 16:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

刚做完了,HIF-1BETA出来了,就是HIF-1ALPHA出不来,到底怎么回事?

831226[使用道具]
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发表于 2013-5-31 17:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，前段时间也一直在纠结这个蛋白的wb，最近两天用HepG2细胞经过CoCl2处理以后发现结果还行，就是有个问题，低浓度的Cocl2处理Hif1a多，比control多不少，而高浓度处理24小时反而一点都没有了，奇怪。另外我用的是Abcam的一抗，1：2000，目的分子量约为120，背景还算干净。

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