蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】为什么marker只跑出三条带？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 27  2/3 ‹‹123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】为什么marker只跑出三条带？

yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
11

发表于 2013-6-1 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

倒是想请问以下，该上海生化所的低分子量蛋白试剂剂盒中是哪6种蛋白？dothing 兄的“6KB”是？似乎BIO-RAD等的“LOW”分子蛋白标准盒最小的也是10以上，若下面还有二个蛋白，哪是什么？若6KD以下还有二种蛋白，10%的胶浓度低了。linca 兄若是要看45-55KD的样本蛋白，14~90+或~200左右的那套正适合。
另用新购买的、加够量也应考虑。
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
12

发表于 2013-6-1 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是和上样量有关啊？
顶部
6327555[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108888
精华 1
积分 303
帖子 242
信誉分 102
可用分 2042
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
13

发表于 2013-6-1 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分离胶12%就会出现6条带，10%就只会有3条带。我遇到过这种情况。
顶部
9900[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75149
精华 0
积分 399
帖子 478
信誉分 100
可用分 3216
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
14

发表于 2013-6-1 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也用上海生化所低分子量marker，根据目的蛋白分子量选择8％的分离胶，每次都只有3条带，电泳电压为浓缩胶55v，分离胶80v，一直不知何故，今天受益匪浅，看能不能纠正过来。
顶部
pulala[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107976
精华 0
积分 288
帖子 315
信誉分 100
可用分 2326
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
15

发表于 2013-6-1 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢各位战友的指点，我把胶的浓度调整到了12%，六条带都跑出来了，很漂亮，谢谢了。
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
16

发表于 2013-6-1 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问你所用的上海生化所的低分子量标准蛋白最低是多大分子量的？我也想用用试试。
顶部
68943512yao[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108886
精华 0
积分 212
帖子 164
信誉分 100
可用分 1557
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
17

发表于 2013-6-1 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位战友，我用5%积层胶、12%分离胶跑SDS-PAGE电泳，在胶前缘跑出两条带，一条应该是前沿指示剂的带，另一条与之平行，不清楚是什么带，请指教!
顶部
damingxia0904[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76226
精华 1
积分 285
帖子 246
信誉分 102
可用分 2011
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
18

发表于 2013-6-1 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加些BSA吧，看看多大！！
顶部
lxh031[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76425
精华 0
积分 335
帖子 389
信誉分 100
可用分 2726
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
19

发表于 2013-6-1 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是个基本知识：

丙烯酰胺在凝胶中的百分比(%) 分离胶的分辨范围(kDa)
15        15-45
12.5 15-60
10 18-75
7.5 30-120
5 60-212

参考 蛋白质技术手册 （汪家政）
顶部
49888[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
20

发表于 2013-6-1 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
除了蛋白降解外，可能原因是：跑的时间太久，低分子的蛋白Marker跑丢了；
　
我有一点不明白，linca战友不是指出其在指示剂到达距底部约1cm处终止电泳，那又怎么会跑过了呢？
顶部
 27  2/3 ‹‹123››