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标题:【讨论帖】喷血推荐blue sliver胶体考染法

avi317[使用道具]
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发表于 2013-6-4 18:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

正在用胶体考染法来做.配制时我加了200ml水和100ml磷酸,再溶(NH4)2SO4时没出现太大的问题.
我想了解的是:染色以后为什么只用去离子水来脱色,用脱色液不是更好吗?不知哪位老兄比较过没有?
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发表于 2013-6-4 18:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没做过,问了一个比较幼稚的问题.我染了以后用水洗之后,效果不错.
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lixi559[使用道具]
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发表于 2013-6-4 18:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
正在用胶体考染法来做.配制时我加了200ml水和100ml磷酸,再溶(NH4)2SO4时没出现太大的问题.
我想了解的是:染色以后为什么只用去离子水来脱色,用脱色液不是更好吗?不知哪位老兄比较过没有?

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我还没试过用一般的脱色液，用水现在挺好脱的，只要时间够，不用换很多次也可以。
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发表于 2013-6-4 18:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：

是呀！质谱胜利归来，出峰率几乎100％，出点率几乎90％，证明这种考染的质谱兼容性很好，大家放心的做吧，没问题。
另外，透露一下，我是在湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组重点实验室做的，他们哪里现在专门做这种染色方法的质谱鉴定，很有经验，从酶切到检索都有高手指导，收费合理，更重要的是，哪里的MM人靓、嘴又甜，GG长得帅又有钱。跟帅哥靓妹们一起实验，出点率不高才怪呢！

最后一下，终于出来了！
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发表于 2013-6-4 18:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知snow 染后的结果是怎样?我染色过夜后,基本上用水冲洗两次以后就直接干胶了,好象用水洗的时间不长就可以.
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发表于 2013-6-4 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
肿瘤

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是呀！质谱胜利归来，出峰率几乎100％，出点率几乎90％，证明这种考染的质谱兼容性很好，大家放心的做吧，没问题。
另外，透露一下，我是在湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组重点实验室做的，他们哪里现在专门做这种染色方法的质谱鉴定，很有经验，从酶切到检索都有高手指导，收费合理，更重要的是，哪里的MM人靓、嘴又甜，GG长得帅又有钱。跟帅哥靓妹们一起实验，出点率不高才怪呢！

最后一下，终于出来了！

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成功率和蛋白質數據庫有很大的關係,一般人的和老鼠的都能做出來
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2013-6-4 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哥们我看了一下,ng肯定没有,大概10ng级吧,和我普通胶粒考染连续三次的灵敏度相当,不过确实值得尝试!在此谢谢各位!另外作者是指标准蛋白达到了ng,具体在2-D中的情况又是另外一回事了,呵呵,原因多多

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我做了一下, 用1-D电泳灵敏度也就是在20ng附近, 不知大家有何看法?
codegreen: "普通胶粒考染连续三次" 怎么做的?
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avi317[使用道具]
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发表于 2013-6-4 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也比较了coomassie blue 和colloid blue stain，可是两者没有什么差别，分不出好坏。

还有一个问题，在做 colloid blue的时候要用到磷酸，而我关心的是蛋白的磷酸化，是不是就只能用普通的考染呢，否则磷酸不是把蛋白都磷酸化了吗。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-6-4 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问一下,这种染色方法可不可以用于SDS-PAGE胶?
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birdfish[使用道具]
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发表于 2013-6-4 18:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做了一下, 用1-D电泳灵敏度也就是在20ng附近, 不知大家有何看法?
codegreen: "普通胶粒考染连续三次" 怎么做的?

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我想主任说的是指染色脱色重复三次
我一直用BIORAD的进行三次重复，效果还可以
一般先用水洗干净胶后，染色1小时，去离子水脱色三次，这样重复三次
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