蛋白质与蛋白组学

请问一下你的肝脏蛋白的详细提取步骤，我现在也在做肝脏2d，效果不是很好。

===========================================================================================================

我做的是大鼠的肝脏
1 断头处死大鼠，（尽量让血液流掉多些），取5克肝脏，冰生理盐水洗2 次
2 将肝脏用剪刀煎碎，倒入MSHE（0.22M甘露醇，0.07M蔗糖，0.5Mmegta，0.1%BSA,2Mm Hepes/KOH PH7.4），用玻璃匀浆器匀浆（冰上进行）后，加入3倍体积的Lysis buffer(30mM Tris,7M Urea,2M Thiourea,4%CHAPS(W/V),PH8.5)裂解2小时
3 期间超声裂解2次，每次工作10秒，间歇10秒，工作次数15次（冰浴）
4 12000rpm，4度，离心30分钟取上清

这个是我们实验室的提取方法，你们具体条件需要根据自己实验室情况再摸索，希望对你有帮助。

我做的是大鼠的肝脏
1 断头处死大鼠，（尽量让血液流掉多些），取5克肝脏，冰生理盐水洗2 次
2 将肝脏用剪刀煎碎，倒入MSHE（0.22M甘露醇，0.07M蔗糖，0.5Mmegta，0.1%BSA,2Mm Hepes/KOH PH7.4），用玻璃匀浆器匀浆（冰上进行）后，加入3倍体积的Lysis buffer(30mM Tris,7M Urea,2M Thiourea,4%CHAPS(W/V),PH8.5)裂解2小时
3 期间超声裂解2次，每次工作10秒，间歇10秒，工作次数15次（冰浴）
4 12000rpm，4度，离心30分钟取上清

这个是我们实验室的提取方法，你们具体条件需要根据自己实验室情况再摸索，希望对你有帮助。

=======================================================

请问一下MSHE中的megta、hepes是什么东西？匀浆加MSHE有什么作用？

请问一下MSHE中的megta、hepes是什么东西？匀浆加MSHE有什么作用？

=========================================================================================================

哦，不好意思，是0.5mM EGTA，金属酶抑制剂，HEPES是一种缓冲剂。MSHE实际上是一种缓冲介质，有人用TRIS-HCL，PH7.4缓冲液也可以

请问一下MSHE中的megta、hepes是什么东西？匀浆加MSHE有什么作用？

=================================================================================

请问加BSA有什么用？不会增加要提取蛋白的杂质量吗？另外组织重量和裂解液之间的比例大概是多少比较好？