【求助】纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗 - 经验共享

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标题:【求助】纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-6-8 16:36 资料个人空间短消息加为好友

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关于还原剂是否兼容的问题，我的观点：
1.钴和镍肯定会被还原的，或多或少，还要看还原剂的类型和浓度。
2.做一次纯化，发现介质没有变色就断定兼容是不科学的。怎么得有浓度的梯度试验，再加上时间的试验吧。
3.能纯化出来就可以了吧，一定要争出是否兼容没啥意义。退一步讲，介质被还原了，但是蛋白已经纯化出来了，那目的不也达到了吗。

作为抛砖引玉吧。

idoww[使用道具]
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发表于 2013-6-8 16:37 资料个人空间短消息加为好友

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非特异性吸附的多少，一方面取决于填料本身，第二方面更重要的是纯化的方法，很多时候想在binding中加还原剂，也是希望能将一些2硫键打开，减少非特异性吸附，我们最近在试验对比一些IDA和NTA填料，在非特异性方面IDA做的也完全可以象NTA一样，而载量上NTA就输的多了。我个人觉得还原剂，能不加，还是尽量不加。

rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-6-8 16:37 资料个人空间短消息加为好友

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还原剂DTT是可以还原镍和钴离子的，会将镍还原为棕色，钴还原为蓝色。

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