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标题:【求助】关于蛋白冻干

00无名指00[使用道具]
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发表于 2013-6-8 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
影响冻干主要因素有以下：
外因：冻干机性能，包括冻干能力、系统密闭性、真空度
内因：蛋白的特性（与水的亲和力）、浓度、缓冲液成分、离子强度、装液量等
每一个参数变化都会造成冻干过程的差异，所以冻干曲线的对比应该考虑以上所有参数的变化！

影响冻干效果最重要的是冻干机性能以及装液量与冻干能力的对比

在不了解样品共熔点的情况下，总的原则是用系统最低温度冷冻样品，尽量冻时间长一些，然后在样品不化冻的情况下尽量加快升华速度。

如果蛋白含水量老是超标，也有可能是蛋白与水的亲和力太强了。
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2013-6-8 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果仅仅是实验，冻量很小，没有必要太在乎冻干曲线，注意使产品温度在共熔点以下2-3度即可，低一些会干得慢些，如果高过共熔点会是产品还没有干就化了，冻不好。
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发表于 2013-6-8 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻干曲线偶比较熟悉，刚毕业时偶得工作就是看冻干机。我们是冻干扰素，冻干曲线一般是先速降，降至工作温度我们那时是-40度，维持一段时间，冻实后，抽真空，缓慢升温，最后差不多干时升到30度左右，出炉。
工业生产对冻干曲线要求比较严格，一不小心就会使产品塌陷，就不能卖了。最惨的一次，8000支有四五千支报废，经理差点没吐血。好的时候能只有几十只不能卖。实验室自己用就不用太严格，但含水量要控制好，个人以为主要有几个因素：蛋白与水的亲和大小；真空度很重要，也即真空泵要好；预冻要冻得比较实，不能时间太短。我们那时水分一般在1%左右。
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2013-6-8 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
塌陷是冻完就马上发生的吗？
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2013-6-8 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知一般开始阶段降温的速率大概该是多少？
谢谢

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一般原理：开始降温快，冰晶小，可能有助于减少水分，但是蛋白容易失活；开始降温慢，冰晶形成好，但将来可能水分大；建议先做预试验：直接将样品放到-70 和用棉花包裹后放到-20，将最终获得的样品直接放到冻干机中（不要抽真空，但是要降到冻干要求温度），这个时候去冻干，观察效果。最后活性检测是否你的蛋白可支持快速降温。我们摸索了自己的一个蛋白，最后降温的速率调整为2C/MIN.
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发表于 2013-6-8 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般原理：开始降温快，冰晶小，可能有助于减少水分，但是蛋白容易失活；开始降温慢，冰晶形成好，但将来可能水分大.......

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升降温速度对蛋白活性是有影响的，好像我的印象是速冻速熔有利于保持蛋白活性，请问您的结论有没有其他参考文章的支持呀？
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lxh031[使用道具]
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发表于 2013-6-8 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
塌陷就是因为冻干时升温太快，导致样品熔化，冻干过程实际上变成了蒸发，最后出箱时有两个后果：1含水量超标、2赋性剂没有形成完美的形状也就是样品塌陷了。所以，塌陷是冻干出箱时就发生了。如果这时候没有塌陷，您大可不必担心它后面会塌陷的。
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lxh031[使用道具]
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发表于 2013-6-8 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我现在手头上没有现成的资料。我只记得以前我们进行一个蛋白药物申报的时候，对其冻干工艺进行过摸索。当时我记得有人讲过“并不是所有的蛋白都符合速冻速溶”，因此我们当时才不得已进行了上面的预冻试验！当然这是否正确，有待进一步的验证。因此我暂时保留我的意见：建议先做预冻存试验，然后冻干观察。举例：如果在进行细胞冻存时则坚决要遵守慢冻快融的原则，这似乎容易理解些。这段时间，由于我时间比较紧张，如果liuqinghai兄或其他战友有时间了，不妨去PUBMED查询一下：
The relationship between temperature variation and protein activity的相关文章，估计在升降温速度对蛋白活性是有影响的认识上会更深刻些！我也希望自己在这个问题上可更深刻的认识些。下面给大家一篇关于比较全面介绍冻干的中文文章。
【篇名】 冷冻干燥的设备性能选择以及配方研究、冻干工艺经验
【作者】 曾军
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发表于 2013-6-8 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
塌陷的原因是，升温过程中温度上升过快，可能有少量水分由固体转为液体，导致塌陷，塌陷据我观察，也是一个相对比较缓慢的过程，并不是突然塌陷，在升温的那段时间里塌陷会越来越多。好像完全避免塌陷也是不太可能的，至少我做过一百多次的冻干生产中，没有一次完全没有塌陷。保持一个较高的优级品率就可以了，比如98%。

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塌陷是冻完就马上发生的吗？
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发表于 2013-6-8 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你们都是搞生产的吗？实验室不用要求这么高吧？
看了你们的讨论，很有收获，觉得自己不懂的太多了，惭愧！
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