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标题:[未解决]从鱼鳞里提了些胶原蛋白，跑了个电泳，但没有条带

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
翔少爷[使用道具]
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发表于 2013-6-22 22:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从鱼鳞里提了些胶原蛋白，跑了个电泳，但没有条带

自己从鱼鳞里提了些胶原蛋白，跑了个电泳（SDS-PAGE，考染），但没有条带。其他的蛋白、marker什么的都能跑出来，为什么就这个跑不出来？是不是蛋白浓度太低了？
我后来用较高浓度的蛋白的酶解液（碱性蛋白酶，不完全酶解），也跑不出来，这是为什么啊？？？
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小米粒[使用道具]
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发表于 2013-6-22 22:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问较高蛋白含量是多少？测过蛋白含量没？
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星星……[使用道具]
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发表于 2013-6-22 22:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样缓冲液是什么？  加完之后怎么处理的咩？
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kaixinjiuhao[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
会不会是分子量太大，形成交联卡在上样口了……
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大球球[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果不是分子量太大的问题，建议将样品缓冲液冻干一部分，或者以超滤等方法，提高目的蛋白的浓度后，在进行电泳
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美丽婷婷[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
会不会是酶解液ph偏离中性 影响电泳
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发表于 2013-6-22 23:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胶原蛋白分子量在100-300KDa之间，这个SDS-page一般跑不动，所以每条带。你酶解后要是水解充分成小分子肽，只要分子量小于10KDa，甘氨酸SDS-page跑不了这么小分子量的蛋白，可以尝试一下Tricine-sds-page
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莫莫莫[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你说的Tricine-sds-page是什么？主要有什么特点？适用于什么？
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千里之外[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Tricine-SDS-Page相对于我们常用的Glycine-SDS-Page来说它用Tricine替代了尾随离子Glycine，由于尾随离子性质的差异，使得Tricine-SDS-Page更适合跑小分子量蛋白，特别是分子量小于10KDa的小分子蛋白或多台，而且电泳时间缩短。
样品每条带考虑一下是不是样品浓度过低，我以前跑的时候样品浓度低也是每条大的
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grace![使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
marker (10~200kD)跑出来了，说明电泳至少是跑得动200kD的样品，我担心的是，胶原蛋白分子形成交联后导致总体分子量太大，可能会超过200kD。如果在那种情况下，该用什么方法？
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