蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 分析百问 » 超声辅助碱溶酸沉法提取蛋白质酸沉时就是沉淀得不多

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[未解决]超声辅助碱溶酸沉法提取蛋白质酸沉时就是沉淀得不多

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
舞疯[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 106595
精华 0
积分 1583
帖子 1945
信誉分 100
可用分 2489
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-1
状态 离线
1

发表于 2013-6-23 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超声辅助碱溶酸沉法提取蛋白质酸沉时就是沉淀得不多

采用超声辅助碱溶酸沉法提取蛋白质，为什么酸沉时就是沉淀得不多呢？？？？整个呈现混浊状态，就是离心后还是混浊的，沉淀下来的很少，请高手指点一下啊，就是调节pH在等电点附近，还是不行啊
顶部
翔少爷[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 108018
精华 0
积分 955
帖子 1109
信誉分 100
可用分 1444
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
2

发表于 2013-6-23 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分组做，慢慢调PH，自己摸索出最佳PH点。
祝你好运
顶部
小米粒[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 108019
精华 0
积分 956
帖子 1111
信誉分 100
可用分 1448
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
3

发表于 2013-6-23 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
试试用酶法除蛋白，蛋白酶酶解效果很好。
个人观点 仅供参考
顶部
星星……[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 108020
精华 0
积分 941
帖子 1102
信誉分 100
可用分 1450
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
4

发表于 2013-6-23 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做pH梯度，看看那个梯度下的自然沉淀最多，等电点时我记得很容易看到大片的絮状物
顶部
kaixinjiuhao[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 106687
精华 0
积分 1533
帖子 1886
信誉分 100
可用分 2236
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-3
状态 离线
5

发表于 2013-6-23 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先，确定你的溶液中有蛋白质。而不是小肽类等物质，然后做梯度实验，看在哪个pH值下沉淀最多。
顶部
大球球[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 108023
精华 0
积分 934
帖子 1088
信誉分 100
可用分 1480
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
6

发表于 2013-6-23 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个很多可能性，一个就是你提取液中蛋白含量。可以先测定一下每ml提取中有多少蛋白，如果含量低，沉淀当然少。在就是你选择的pH是否是最适宜沉淀的pH。一般人都会跟你说等电点，但是提取液中是混合物，很多种蛋白，这时候谈等电点没什么意义。跟上面几楼说的一样，可以做一个梯度pH实验，找到最适宜pH。还有一些蛋白不适宜酸沉淀，你可以换硫酸铵或TCA沉淀
顶部
美丽婷婷[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 106600
精华 0
积分 1569
帖子 1937
信誉分 100
可用分 2482
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-1
状态 离线
7

发表于 2013-6-23 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先要测下你所提取的东西蛋白质含量吧，如果蛋白质含量本来就很低，那沉下来的肯定就少啊
顶部
双_视野[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 108026
精华 1
积分 956
帖子 1108
信誉分 102
可用分 1400
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
8

发表于 2013-6-23 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
确定合适的等电点，有些蛋白是混合体，等电点不一，你多做几个对照试一下，其次，前面的碱溶可能是碱液浓度低，这样溶解的蛋白就比较少，酸沉自然沉淀少，还有一点，可以酸沉久一些。你试试看，不知道你做的是从哪里提取的蛋白
顶部