小中大做酶活测定方面的高手,我的实验设计有问题吗?
我要从柚皮中提取果胶,现在有个问题是,要事先灭酶,防止提取过程中果胶酶分解果胶,降低产率。我想通过测定酶活的方法,确定沸水灭酶时间,实验设计是这样的:
1)沸水一定时间,取1g灭酶后柚皮粉末2份,各加纯水5mL,标号1、2;
2)充分震荡两管,1号立即过滤或离心,取上清液1mL,加DNS0.75mL后,沸水浴10分钟,稀释成5mL,测520nm处吸光值;2号90度水浴半小时后,过滤或离心,取上清液1mL,操作同上
按道理,果胶酶没有灭活的话,后边的吸光值应该要大的,但是测定效果不好,而且几乎没什么重复性。
请教一下,做酶活测定方面的高手,我的实验设计有问题吗?