蛋白质与蛋白组学

DOC是用水配

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请问DOC-TCA法是否就不用像TCA法，-20度放置半小时以上拉。
按蛋白质技术手册操作即可？

我的带跑得宽度不同，是否是因为盐浓度的问题？
TCA法能沉淀下盐来么？
我是将沉淀用丙酮洗一下，然后溶于20ul水，不好溶，我加了5ul 2N氢氧化钠就溶了，然后取5ul加5ulbuffer煮了上样。
丙酮为什么要用-20度的？？

想问SDS-PAGE的电泳缓冲液可以重复使用吗？另外，如果蛋白质降解了，跑出来的胶会是什么样子？

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可以的，蛋白降解主要会出现明显的拖带现象。

小妹请教一个问题：
我买了一个蛋白质低分子量的marker，分子量分别为97.2kD、66.4kD、44.2kD、29kD、20.1kD、14.3kD，按照说明书上的上样，一次5微升，结果只有97.2和14.3的带清楚，其余的带模糊不清，而且弥散，特别是20.1的带几乎没有。后来我把上样量提高到10微升，结果还是一样的。从说明书上的图例来看，这些带的亮度差不多，请问这是什么原因，是因为我的操作问题吗？我用的是12％的分离胶。我刚刚做SDS-PAGE电泳，好多问题还需大侠指教。谢谢！

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不知道你用的是哪个公司的marker，以前跑的怎样？
可按以下步骤逐一排除：
1、降低分离胶浓度，10％的试试；
2、看看是不是染色液和脱色液的问题，染色液脱色液使用次数过多可能会出现这种情况；
3、看看是不是电极缓冲液的问题；
4、如果可能的话，换用别人成熟的电泳系统来做一下，排除marker处理的问题；
5、如果上述处理后还不能正常，就 可能是marker产品自身的原因了。换一家公司的用了。

请问楼主：我做的蛋白是11kd的小蛋白，样品是用8M尿素提取的细胞总蛋白。跑12％的胶常常跑到底端或干脆跑不出来，而跑了几次15％的胶，却总是上半部分条带很清晰，下半部分常常条带模糊，做western根本杂不出11kd的目的蛋白，这是咋回事啊？。谢谢！

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Marker跑的怎样，看看是不是电泳缓冲液的问题。