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标题:【讨论帖】SDS-PAGE电泳求助专用帖

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嗯,谢谢楼主了~~那我就先用212kd的试试
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谢谢楼主的精彩指点!
楼主 我做的是胶原蛋白的电泳
蛋白的分子量大概是10KD左右
请问要用多少浓度的分离胶和浓缩胶比较合适??
我的主要目的是分析纯度,请问需要注意些什么?
我试过用10%的分离胶跑过,结果是出现了三条蛋白带,但是靠得比较近,请问怎么让它们可以拉开一点??
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补充问一下,我在一篇资料上看到说胶原蛋白不能用SDS-PAGE测分子量,请问楼主是不是真的?我已经买了标准蛋白样品,不能测的话就哭死了~~
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谢谢楼主的精彩指点!
楼主 我做的是胶原蛋白的电泳
蛋白的分子量大概是10KD左右
请问要用多少浓度的分离胶和浓缩胶比较合适??
我的主要目的是分析纯度,请问需要注意些什么?
我试过用10%的分离胶跑过,结果是出现了三条蛋白带,但是靠得比较近,请问怎么让它们可以拉开一点??

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用20%左右的分离胶试一下,应该可以放开。如果还有问题,可换电泳缓冲液。我曾经用它分离出3kd的蛋白。
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ukonptp[使用道具]
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10kd的蛋白应该用tricine电泳缓冲液来跑电泳,可用15%的胶来试试。
胶原蛋白不甚了解,你可具体查一下!sds-page判断蛋白分子量的原理,是利用蛋白在sds和dtt(或B巯基乙醇)的作用下,使蛋白分子高级结构被破坏,同时在sds的包裹下形成椭圆形的球状复合物,屏蔽了蛋白自身的电荷,使所有蛋白的电荷量相近,在电场的作用下,sds-蛋白复合物的迁移率与分子量大小成线性正相关,分子量大的跑的慢,小的跑的快。从而可根据标准分子量拟合出标准曲线,计算出未知蛋白的分子量大小。
糖蛋白虽然存在线性关系,但其结合sds的能力与标准蛋白不同,因而一般不能用该方法来计算其分子量大小。
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am10[使用道具]
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下面(Attanchment里面)是我走的SDS——PAGE,蛋白的分子量为2800;
走的分离胶的浓度为20%;不知怎么回事,分子量为这么小的蛋白好像很容易扩散,走不出像Marker那样的标准的带!我估计不是蛋白溶解性的的原因,因为marker最下面的那条带也扩散的很厉害,但是上面的几条带有很漂亮,估计这是小肽本身的性质所决定的吧!还有我上的蜂毒标准样品也扩散的很厉害!
小蚂哥,有什么方法可以防止这样的扩散吗?
SOS..........SOS........SOS..........
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ukonptp[使用道具]
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多加点甘油试试吧。
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kuohao17[使用道具]
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加在上样的蛋白里吗?
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okhaha[使用道具]
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我做的是乳酸聚丙烯酰胺凝胶电泳,有两个问题:
1,胶凝的太快了,大概几分钟就凝固了。
2,加样后,样品不往凝胶里跑,不可能是正负极弄反了。
请各位高手指教。
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birdfish[使用道具]
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楼主的总结让人受益匪浅。
我有两个问题想请教:
1 我的电泳跑出来下面的一些条带(就是靠近溴芬兰的那端)总是比较糊,不知道会是什么原因呢?很多试剂都已经重新配过了。
2 电泳缓冲液中的甘氨酸是起什么作用呢?因为我看到两个配方,而其中仅甘氨酸的浓度有些差异
请大侠们指教!
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