小中大10kd的蛋白应该用tricine电泳缓冲液来跑电泳,可用15%的胶来试试。
胶原蛋白不甚了解,你可具体查一下!sds-page判断蛋白分子量的原理,是利用蛋白在sds和dtt(或B巯基乙醇)的作用下,使蛋白分子高级结构被破坏,同时在sds的包裹下形成椭圆形的球状复合物,屏蔽了蛋白自身的电荷,使所有蛋白的电荷量相近,在电场的作用下,sds-蛋白复合物的迁移率与分子量大小成线性正相关,分子量大的跑的慢,小的跑的快。从而可根据标准分子量拟合出标准曲线,计算出未知蛋白的分子量大小。
糖蛋白虽然存在线性关系,但其结合sds的能力与标准蛋白不同,因而一般不能用该方法来计算其分子量大小。