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本人最近在做蛋白纯化,请问各位如何从SDS-PAGE胶中提取蛋白质。曾看到有帖说可以捣碎凝胶,加缓冲液提取。能否请问一下具体方法如何
以下是我收集的从PAGE回收DNA的方法不知对你有用否:
"压碎与浸泡法"1)用刀切下含目的条带的凝胶.2)将凝胶块转移至微量离心管,用一次性使用的吸头对着管壁将凝胶挤碎.3)估计凝胶块的大致体积,在微量离心管中加1-2倍体积的洗脱缓冲液.洗脱缓冲液:0.5mol/L乙酸铵.10mmol/L乙酸镁.1mmol/L EDTA (PH8.0) 0.1%SDS 当洗脱缓冲液的体积不大于0.5ml时,操作更为方便.因为洗脱的DNA片段可在一个微量离心管中用乙醇沉淀.4)盖上离心管盖,旋转平台上37摄氏度温育。小片段DNA(<500bp)的洗脱需3-4小时,更大的片段需12-16小时.5)用微型离心机于4度12000g离心一分钟.将上清液转移至另一微量离心管.6)上清液通过一次性使用的塑料层析去除残留的PAGE凝胶块.7)加两倍体积处于4度的乙醇,冰上放30分钟 ,微量离心机4度12000g离心10分钟以沉淀DNA