蛋白质与蛋白组学

1 .可能是玻璃板上原有的杂蛋白或者是配胶所用的缓冲液里面混入蛋白，不太可能是样品中的蛋白。
2 .散热不均，建议放入冰水浴中，或直接放如冰箱里。
3.marker浅的原因可能是脱色脱过了，也可能是上的太少。如果跑不全可能是跑得时间过短，或分离较做的太短。跑分离胶时，电压大约是在10v-20v/cm，不要太大。您的分离较电压太大了，100v就够了。
4.指示剂为小分子物质，跑得速度要比大分子快很多。所以出现这种情况也正常，建议指示剂跑出胶以后再停止电泳。

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我的目的蛋白分子量约为32KD，浓缩胶为5%（70V），分离较12%（150V），Bio-Red的电泳系统。但电泳老是出问题，望各位指教，谢谢！

1.小分子量的杂蛋白出现在溴芬兰带的下面；

2.溴芬兰带呈微笑状；

3.marker带太浅或者只跑出其中几条；

4.跑胶时指示剂已到胶的底部，但染色后距底部还有一段距离。

问题可能出现在pH值上，能否再校正一下所配缓冲液。

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前一阵子SDS-PAGE跑得挺好的，最近新配了好些溶液，结果胶总跑不好，感觉样品跑不动，但溴芬兰正常，请问可能是什么原因造成的？？谢谢！（附图片）

附上面的图

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我跑得marker带也是5条 90多的那条带跑不出来 郁闷中

最近我用10%的胶跑蛋白，Marker中的14.4KD的一条总是不见了，而用12%的胶跑的话，Marker却是正常的，开始我以为是跑丢了，所以我二次跑的时候就在指示剂胶还有大约2cm的时候就停下来了，却依然没见14.4KD的条带，这是什么原因造成的呢？谢谢！非常急！

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可换用新的电泳电极液跑跑看。
14.4KD的条带在电泳中确实有时会丢，也可能与你的marker质量有关。
如果你的结果不是以该条带来参照的话，跑不跑的出来无所谓了。
如果是小分子量的蛋白电泳，可提高胶的浓度，再跑跑看。

本人最近用还原性及非还原性电泳跑胶，结果显示10,24kd，故得出结论为单体和二聚体形式（二聚体由于空间结果影响迁移率）。可是老外说非还原性电泳不能证明二聚体，让我寻找它法“ Other methods are required to demonstrate the degree of association of the protein. ”还说，没有别的方法就不要得出二聚体的结论“If no other data is available, the conclusion that the protein is a dimer should be removed.”

我的疑问：如果不能得出二聚体的结论，那非还原性电泳怎么会是24kd呢？
如果不用二聚体的结论，那我该怎么解释24kd，就说多聚体？或蛋白发生association（不知怎么翻译）？
谢谢

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我认为老外的说法也是有道理的，不知你说的10，24kd是什么意思，是两个单体分别位10kd，24kd吗？
在SDS－PAGE电泳中，只有经过变性处理的蛋白分子在电泳中所跑出的条带才有参考价值，而且也不是所有蛋白都可以用sds－page电泳来测定分子量的。
还有一点就是，非变性的蛋白分子结构复杂，在凝胶微孔中可能跑的不一致，因此不能与标准分子量作对照。
你可在园子里搜搜如何鉴定分子量，包括单体和二聚体分子量的测定方法。