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标题:【讨论帖】SDS-PAGE电泳求助专用帖

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-6-28 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请各位帮忙看看我的这张电泳图，很奇怪的目的蛋白，怎么就跑成那样了啊？
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INK[使用道具]
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发表于 2013-6-28 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的蛋白质样品加上5×loading buffer(汪家政蛋白手册上的配方），90度5分钟之后出现了颗粒沉淀，请问这是怎么回事啊？？
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发表于 2013-6-28 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主帮我看看我的电泳照片吧。跑来好多次了，一直是这样！很多莫名的横带。电泳液是新的！靠边的两个孔都没有上样，连MARKER的泳道里都有！郁闷！


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2013-6-28 16:28
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2013-6-28 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近在做GUS-GM-CSF融合蛋白在烟草中的表达,我用组织染色法确定叶片中有GUS蛋白,而且表达量也挺大的.提取的蛋白样品也用凝胶荧光检测到有GUS蛋白,但是SDS-PAGE之后,但与未转烟草对比,却看不到差异条带,这是什么原因?怎么解决呀?哪位楼主给点意见,不胜感激!!
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hold住[使用道具]
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发表于 2013-6-28 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做27KD蛋白，用15%胶，可溴酚兰已跑到胶底部，但蛋白却仅跑一半。我用的Tris－HCL缓冲系统的浓缩胶是pH6.8，分离胶pH8.8，不知怎么改进。谢谢。
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发表于 2013-6-28 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

急求：请教Tricine-SDS-PAGE胶时样品缓冲液中加入酚红与SDS-PAGE中加入溴酚蓝一样都是作为指示吗？哪Loading Buffle里还需要加入溴酚蓝吗？谢谢！
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-6-28 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教：菌液离心除去菌体，取上清，由于其中蛋白质浓度太低，经SDS-PAGE，看不到条带。所以将上清真空减压浓缩20多倍，浓缩液的蛋白含量约为一点几mg/ml,进行SDS-PAGE。
样品在浓缩胶部分较难浓缩，蓝色的带一直比较宽，其他同学的样品都浓缩成窄窄的一条篮带，我的有他们的两三倍宽。继续跑时，过会看到蓝带的前后都有黄色的物质。染色脱色后，竟然没有条带，不知何故，请楼主指教，万分感谢！
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子衿青青[使用道具]
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发表于 2013-6-28 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
背景太浓：
最近一段时间做western ，发现压片后背景色很浓，以前的条件（那时基本没有背景）与现在做的一样（一抗二抗的比例），封闭的时间足够长，洗膜是10min×4次，可是总是发现背景很深，也不知是什么缘故，会不会是提蛋白过程出现问题，还是洗膜的时间不够长？

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最近又重新提蛋白做了一次，发现好多了，一抗二抗的稀释浓度也没有改变，我觉得可能是提蛋白的过程出现了问题，大概是细胞裂解的时间不够长，或者是细胞裂解夜的量太大了导致目的蛋白的浓度变小了，也有可能是离心的时间不够长，我觉得差不多就是这几个原因了，反正现在问题是解决了，哈哈，顺便提一句，版主好久不来了啊。
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发表于 2013-6-28 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问：我的样品用Folin-酚法测得蛋白浓度为1mg/ml，可是跑SDS-Page时上样量的达到100ul才能看得见样品。如果上样20ul什么也看不见，我的蛋白是碱性蛋白，Loading buffer是2*的。染色液没问题，Marker染的很好。请问这是什么原因？
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ero11[使用道具]
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发表于 2013-6-28 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家好，我刚做实验步久，有问题请教大家，请问：现在急需免疫小鼠，所以决定切胶，请问具体操作是怎样得啊？
1）跑PAGE的上样量应该怎样？样品还是要用2×SDS-PAGE上样缓冲液处理后再上样，是吗？
2）一般检测时候，我只上15微升的样品，现在需要抠胶，那么是否得增大上样量？
3）用考马斯亮兰染色后再切的胶，影响是否会很大？
4）切下的胶应该怎样处理，是直接把切下的胶埋到小鼠腹腔，还是用上面方法把蛋白透析出来呢？
5）一般用这种方法得切多少胶？我想免疫8只小鼠？
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