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我的课题是纯化一个真菌产的膜结合的酶蛋白,这个蛋白的疏水性比较强,离子性较弱。为了维持蛋白的活性, 我在缓冲液中加了0.1%的非离子型表面活性剂(Triton X-100)。如果缓冲液里不加表面活性剂,那么目的蛋白在缓冲液中的溶解度非常低,超滤浓缩时甚至有部分目的蛋白会析出。表面活性剂的存在对蛋白的纯化没有影响,但是在SDS-PAGE分析中却出现了问题。
这几次在蛋白电泳分析时都出现了同样的现象---胶上的条带非常非常不清楚。SDS-PAGE分离胶的浓度是12.5%,浓缩胶的浓度是5%。据我个人分析,应该是表面活性剂起了一定的干扰作用,因为在SDS——PAGE上样前,我把较纯的蛋白冻干浓缩了10-20倍(如果不浓缩,那么蛋白量达不到显色的要求),这样表面活性剂业随着浓缩了10-20倍,即表面活性剂的浓度变成1%-2%。
有资料报道说应该在电泳A液中加少量的Triton X-100,但是绝大多数的报道并没有提到有什么特殊的处理步骤。