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标题:【讨论帖】SDS-PAGE电泳求助专用帖

veiwu[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
斑竹辛苦了，我有一个问题：我用的是北京六一仪器厂生产的电泳仪，最近跑beta-actin时，10%的胶4到5个小时Marker才刚跑开。听同学说他们的也就是一个小时就够了，回顾操作没有问题，很不明白为什么跑得这么慢是我的电泳仪的问题吗？请不吝赐教。
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30moonriver[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问搂主，我在转膜时用１２０V恒压９０分钟，一般没问题，但有时电源会突然自动跳至电流转，此时没法再设回电压，请问是电源问题还是短路或其他原因？
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chenshuanhe[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
斑竹辛苦了，我有一个问题：我用的是北京六一仪器厂生产的电泳仪，最近跑beta-actin时，10%的胶4到5个小时Marker才刚跑开。听同学说他们的也就是一个小时就够了，回顾操作没有问题，很不明白为什么跑得这么慢是我的电泳仪的问题吗？请不吝赐教。

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有可能是上槽电泳液加少啦,没有完全覆盖上样孔.以前我也碰到过这种情况.
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9900[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想请教您下，大肠杆菌表达体系，诱导后目标蛋白在包涵体中，菌体经过菌体洗涤、超声破碎、包涵体洗涤、盐酸胍溶解变性后透析复性，得到复性液。但对比目标蛋白在全菌电泳、复性液以及复性液等电沉降这三条SDS-page泳道结果发现，复性液等电沉降后目标蛋白比全菌电泳时下移约1K，复性液直接电泳比全菌电泳下移约2K，这是为什么呢？
会不会是蛋白质在复性之后带上了一定的正电荷（复性液pH在等电点之上）或者是破碎变性过程中肽链断了？
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发表于 2013-6-28 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主，从你那受益匪浅啊。我的蛋白条带很密，而且拖尾，35kD以下的条带根本看不清啊。而且，marker的最后两条带18.4kD和14.4kD比其它的要模糊许多啊？这是什么原因啊？
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发表于 2013-6-28 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主您好：

我一直是跑SDS-PAGE电泳的，在原来的实验室一直跑的很好，现在到了新实验室开始跑电泳，所有的试剂都是新买的，结果我配10%的胶始终不凝，所有的配方我都检查了，和原来的一样的，能帮我找找原因吗?
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发表于 2013-6-28 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，电泳有无最低上样量，今天每孔上样20ug，居然考马斯亮兰染色后没有条带出来，真是奇怪，难道是我的染色脱色出现了问题。还请各位指教，如果能给出一个考马斯亮兰的染色脱色详细方案，本人更是不甚感激！
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发表于 2013-6-28 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
marker条带歪斜是怎么一回事啊？请高手指点


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xue258[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主您好：

我一直是跑SDS-PAGE电泳的，在原来的实验室一直跑的很好，现在到了新实验室开始跑电泳，所有的试剂都是新买的，结果我配10%的胶始终不凝，所有的配方我都检查了，和原来的一样的，能帮我找找原因吗?

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所有配方都一样，那就要怀疑试剂是否有问题，换个厂家的APS跟TEMED看下
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xue258[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，电泳有无最低上样量，今天每孔上样20ug，居然考马斯亮兰染色后没有条带出来，真是奇怪，难道是我的染色脱色出现了问题。还请各位指教，如果能给出一个考马斯亮兰的染色脱色详细方案，本人更是不甚感激！

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1ug都可以看出来。
染色脱色配方 用甲醇和醋酸的那个配方
另外染色脱色时间跟温度关系密切，建议50度染色 脱色
染色40分钟，脱色1.5小时，OK
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