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标题:【讨论帖】SDS-PAGE电泳求助专用帖

xue258[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
marker条带歪斜是怎么一回事啊？请高手指点

=======================================================

歪有可能是胶不均匀，如果每次都是歪的，还有一个可能是铂金丝的问题
另外两边的孔经常会有些歪，边缘效应很难那避免 ，但不会像你的那么歪
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avi317[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，电泳有无最低上样量，今天每孔上样20ug，居然考马斯亮兰染色后没有条带出来，真是奇怪，难道是我的染色脱色出现了问题。还请各位指教，如果能给出一个考马斯亮兰的染色脱色详细方案，本人更是不甚感激！

1.对于G250而言,其灵敏度参考资料上有说是3ng/条带,不过我们现在上样仍然按10ng/条带的灵敏度算
2.G-250脱色直接用水脱色就ok
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
水脱色很慢的
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loli[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主您好，我想请教下，我蛋白酶应该是27KDa左右，用millipore超滤管浓缩后，用bca法测的蛋白浓度约为1.1mg/ml，上样量为20微升，可是怎么也跑不出条带,能帮我分析下吗？我用的是4%浓缩胶，12.5％分离胶，100V跑浓缩胶，150V跑分离胶的，用考马斯亮兰染色的，marker跑得很正常，帮同学同样处理的样品也跑得很正常。跑SDS－PAGE前还测过酶活，酶活没有下降，可是就是跑不出条带，急啊，谢谢
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Ao7[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近做梯度胶一直不太理想，请问配制梯度胶加甘油是何道理？甘油的浓度对梯度胶有什么影响啊？
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发表于 2013-6-28 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主好，帮忙看看我的电泳图。我用的是 5% 和 12% 的胶 ， 电压分别是 80 V 和120 V . 最右边一条是 Marker。左边两条 是样品，下面一些小分子量的带没有跑出来。不知道可能是哪些原因。谢谢！
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再补充一点： 我的上样量： 20微升样品 + 20 微升 2 x buffer （样品约为 50微克），marker 20微升。 还有就是 煮沸后直接上样了，没有离心，这会有影响吗？谢谢！
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89tongzijun[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家好！ 我那个蛋白是二聚体，所以要跑非变性的蛋白电泳。各位谁跑过非变性的蛋白电泳？麻烦和我说说.
电泳缓冲液，分离胶，堆积胶还有样品buffer都按书上的配了，跑出来的是一条带。但现在问题是marker，我用sds-page的marker跑，跑的不好，模糊不清。请问sds电泳和非变性电泳的marker不能通用吗？如果不能通用的话非变性的marker大家都用哪个公司的，应该注意什么？请教大家！谢谢！！
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发表于 2013-6-28 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教楼主：
我做的脑脊液，PH3-10NL的胶条，用的伯乐的一套仪器，银染。帮忙看一下要怎样改进呢？要用PH4-7的胶条吗？关于聚焦，样品处理，聚焦等方面。
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owanaka[使用道具]
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发表于 2013-6-28 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的电泳图如下：有些泳道有一条染色较深的竖带，像第七泳道，请高手指点！
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