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标题:【讨论帖】SDS-PAGE电泳求助专用帖

89tongzijun[使用道具]
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我的电泳图如下:有些泳道有一条染色较深的竖带,像第七泳道,请高手指点!

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是不是样品里面什么固体颗粒??
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相关疾病:
头痛
楼主及各位高人:
我在跑SDS-PAGE电泳出现了一些问题:1、条带和相邻的条带连成一条弧形,是由于刚才点样以后,放置了一段时间,样品扩散?;2、跑聚集胶时电压用的是120v,但电流只有20mA,保持恒压进入分离胶以后,但是电流只有10mA了。而且越跑越慢!电流越跑越低。光聚集胶就跑了3个小时,分离胶花的时间更长。我的试剂和缓冲液都是新配的。怎么回事啊?头痛啊 ,新手上路,请大家多帮忙啊!
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04906[使用道具]
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我的目的蛋白是55KD的,麻烦各位推荐一套合适的标准蛋白,谢谢各位
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请问丙酮沉淀蛋白后,上样时如何使沉淀溶解,老是溶解不了,郁闷阿
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我纯化的蛋白,透析后用聚乙二醇浓缩,BCA法定量为0.37mg/ml,可是为什么蛋白电泳看到条带呢? Marker是正常的,处理的同批次的样品,别的都出来了,可是就目的条带没有出来?
还望指点下,谢谢了
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utt0989[使用道具]
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楼主你好,想请问几个问题:
⑴蛋白样品离心后取上清,加4Xloading buffer,煮之前忘了没混匀,loading buffer沉在下面,煮完后混匀对样品有影响吗?
⑵样品煮完离心后甘油沉到管底了,分装后各管的蛋白浓度会不会不均一,蛋白质在甘油和水中溶解度差别大吗?
⑶有没有什么办法、窍门让条带跑的细且直,条带之间不连接,(上样量又不能太少,有些蛋白不好测)
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utt0989[使用道具]
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你好,请问一下,蛋白样品在加了loading buffer 并煮沸后原则上不应发生降解,但为何-20度长时间保存的样品转膜后丽春红染色后条带拖尾?
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skytree[使用道具]
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楼主你好,想请问几个问题:
⑴蛋白样品离心后取上清,加4Xloading buffer,煮之前忘了没混匀,loading buffer沉在下面,煮完后混匀对样品有影响吗?
⑵样品煮完离心后甘油沉到管底了,分装后各管的蛋白浓度会不会不均一,蛋白质在甘油和水中溶解度差别大吗?
⑶有没有什么办法、窍门让条带跑的细且直,条带之间不连接,(上样量又不能太少,有些蛋白不好测)

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1、应该没有影响。煮沸的过程中有对流作用。
2、甘油不应该沉底的。甘油与水混溶,不存在分相问题。
3、做熟了自然就好了。可以分隔上样,样品之间的孔只加1*loading buffer,这样会浪费孔,但条带确实会好看些。
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lixi559[使用道具]
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诱导后的菌液怎样处理后能做western b?我是超新手帮帮忙啊~!
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JK.jon[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 lixi559 于 2013-6-28 17:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

诱导后的菌液怎样处理后能做western b?我是超新手帮帮忙啊~!

不需要特别的处理啊,就像做普通的SDS-PAGE一样先做电泳。

建议您先找一些WB相关试验技术资料来看一看。

版内有很多,请搜索。
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