小中大“SDS-PAGE,特别是等点聚焦和PAGE结合(双向电泳)也是检测蛋白质结构变化的很好的方法。”这是《血液制品去除灭活病毒技术方法及验证指导原则》中的一句话,目的想考察蛋白质制品灭活病毒前后的结构变化。
我公司产品情况:冻干制品(主要含有纤维蛋白原,另有少量的凝血因子、白蛋白)。
我公司依照《血液制品去除灭活病毒技术方法及验证指导原则》的建议,想采用SDS-PAGE进行蛋白质制品灭活病毒前后的结构变化研究。那么是采用还原SDS-PAGE(加入巯基乙醇),还是非还原SDS-PAGE呢?
另外,2010版药典三部附录IV C SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法中写道:“非还原电泳凝胶经扫描进行纯度分析;还原电泳凝胶中分子量标准,经扫描获得分子量标准曲线,计算供试品的分子量。”
我是否可以这样理解 :我公司产品含有三种蛋白,是混合物,因此不适合用非还原SDS-PAGE,因为非还原电泳凝胶是进行进行纯度分析的,无法分析混合物。然而如果用还原SDS-PAGE,就破坏了蛋白质的结构,无法进行灭活病毒前后蛋白质结构变化对比。我是不是理解错了?
针对我公司的这种实验目的,选择哪一种实验方式更合理呢?