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标题:【讨论帖】SDS-PAGE电泳求助专用帖

xiaoxiaoniao[使用道具]
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最近跑的wb,marker在浓缩胶已经开始分开,marker上了10μl,最终跑完电泳后marker的条带又粗又浅,以前做的不是这样的,还是蛮好的,不知道什么原因,头大,请各位帮我解答一下,多谢多谢!
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966735obeng[使用道具]
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楼主您好 昨天跑自己提取的二型胶原蛋白(MW 117左右)电泳,胶浓度8%,用稳压94v,电泳液配置应该没有问题,跑完只用了1小时10分钟,考马斯蓝染色后只有maker清晰显示,而自提蛋白和标准阳性对照蛋白均没有任何条带,请您帮忙分析一下原因,谢谢!
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zsxan1990[使用道具]
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电泳的过程中由于漏液,导致电泳终止,对实验有什么影响吗?
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pencil菲[使用道具]
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好帖啊!

请问下楼主,跑完PAGE脱色完成后,整个凝胶比刚跑完时明显缩小了很多,不知道是什么原因,请指教,谢谢。
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orangecake[使用道具]
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SDS-PAGE 下胶注入后,加水封闭,加水时应该怎样加才能不让胶面凹凸不平??是不是水刚加下去的时候是不平的?要等凝胶凝固了就自然会平?有时刚加水后我就能看到波浪的折线,就是不平,那等一下水能不能把它压平??

有时刚加水后看不到折现,那一般都是平了。

到底怎么加水才能使下胶平?
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hustwb[使用道具]
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“SDS-PAGE,特别是等点聚焦和PAGE结合(双向电泳)也是检测蛋白质结构变化的很好的方法。”这是《血液制品去除灭活病毒技术方法及验证指导原则》中的一句话,目的想考察蛋白质制品灭活病毒前后的结构变化。

我公司产品情况:冻干制品(主要含有纤维蛋白原,另有少量的凝血因子、白蛋白)。

我公司依照《血液制品去除灭活病毒技术方法及验证指导原则》的建议,想采用SDS-PAGE进行蛋白质制品灭活病毒前后的结构变化研究。那么是采用还原SDS-PAGE(加入巯基乙醇),还是非还原SDS-PAGE呢?

另外,2010版药典三部附录IV C SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法中写道:“非还原电泳凝胶经扫描进行纯度分析;还原电泳凝胶中分子量标准,经扫描获得分子量标准曲线,计算供试品的分子量。”
我是否可以这样理解 :我公司产品含有三种蛋白,是混合物,因此不适合用非还原SDS-PAGE,因为非还原电泳凝胶是进行进行纯度分析的,无法分析混合物。然而如果用还原SDS-PAGE,就破坏了蛋白质的结构,无法进行灭活病毒前后蛋白质结构变化对比。我是不是理解错了?

针对我公司的这种实验目的,选择哪一种实验方式更合理呢?
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moonlight45[使用道具]
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是不是样品不一样 染色方法就不一样呢
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nvdabing[使用道具]
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SDS-PAGE 下胶注入后,加水封闭,加水时应该怎样加才能不让胶面凹凸不平??是不是水刚加下去的时候是不平的?要等凝胶凝固了就自然会平?有时刚加水后我就能看到波浪的折线,就是不平,那等一下水能不能把它压平??

有时刚加水后看不到折现,那一般都是平了。

到底怎么加水才能使下胶平?

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这个我们这边是用异丙醇压平分离胶的液面,等胶凝后再蒸馏水清洗干净。效果不错。
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windy+++[使用道具]
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楼主您好 我是一学生 准备做电泳的实验 想问下样品药物的处理方法 由于样品不是粉末状 要研磨 我想请问一般都是用什么溶液处理样品的 是Tris-HCl+百分之十的SDS吗?需要加甘油或者蔗糖吗?如果要加,那么甘油或蔗糖在这过程中起的是怎么样的一作用呢?
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tangxin_80[使用道具]
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我最近配的SDS-PAGE胶的上样孔底部老是会有小孔(就是与梳子头部接触的胶老是会产生小泡,凝固后就变成小孔了,拔了梳子重新插还是不能很好地赶走小泡),上样后小部分样品流到这些小孔里,这样的结果就是同一个上样孔里少部分样品跑在其余样品的前面。为什么与梳子头部接触胶老是会产生小泡?
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