蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】空肠、回肠、胰腺的β-actin表不表达？

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标题:【求助】空肠、回肠、胰腺的β-actin表不表达？

lagua123[使用道具]
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发表于 2013-6-29 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您好，是western检测到的吗？ 我查看b-actin说明书貌似有说心肌和骨骼肌不能用b-actin作内参，请问你用的哪个型号哪个公司的b-actin,产品

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客气了，我做的是western blot啊，文献上的图片也是WB的啊。我用的是个国产的一个公司的
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2013-6-29 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上您好，我一抗和二抗比例均是1:2000.上样按50ug计算的
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DNA[使用道具]
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发表于 2013-6-29 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一抗换成1：5000，二抗换成1:10000，上10ug试试
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发表于 2013-6-29 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您给我彻底搞迷糊了，可否发一份贵公司的b-actin说明书，我组内是用的cell singal的
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发表于 2013-6-29 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一抗换成1：5000，二抗换成1:10000，上10ug试试

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您这个比例都超出抗体说明书的范围了。
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发表于 2013-6-29 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

尽信书，不如无书。我觉得没有什么原则性问题。因为这个是内参蛋白，量非常大
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2013-6-29 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

貌似并不是所有的组织都有b-actin表达，照您这么说，我 举个不恰当的例子，作为医生，我可以不顾 禁忌症和药物有效剂量随便开药吗
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DNA[使用道具]
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发表于 2013-6-29 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
当然不是你说的那种情况了，我是根据组织的目的蛋白丰度来决定抗体比例和上样 量得。你这种质疑的精神还是不错的，当然有时候还是需要结合实际情况，实践出真知。祝你实验顺利
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2013-6-29 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能的建议 样品10ug 二抗稀释1；10000 那岂不更稀？？您这么做过？
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发表于 2013-6-29 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
当然做过，总是觉得信号还是太强
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