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标题:【求助】原核表达蛋白纯化

lgm[使用道具]
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发表于 2013-6-29 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我现在做的实验与楼主类似。
我的融合蛋白的分子量有45KD，超声波破碎，没用溶菌酶，上清中出现了可溶性蛋白，沉淀中也有，但是请教了几位老师说，可以用上清做下一步的纯化了，老师说可以做亲和层析，也可以做离子交换层析（更便宜），另外，我们还有一台新的Amersham公司（做纯化很专业的公司）的层析纯化系统要开始用。
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bling[使用道具]
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发表于 2013-6-29 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在做的实验与楼主类似。
我的融合蛋白的分子量有45KD，超声波破碎，没用溶菌酶，上清中出现了可溶性蛋白，沉淀中也有，但是请教了几位老师说，可以用上清做下一步的纯化了，老师说可以做亲和层析，也可以做离子交换层析（更便宜），另外，我们还有一台新的Amersham公司（做纯化很专业的公司）的层析纯化系统要开始用。
希望各位高手多指导，因为我做纯化是新手，不知是否对楼主“咪咪的梦”有帮助！！！

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如果有tag那亲和就可以了
不用亲和，离子交换一步很难达到要求的纯度，还是要结合其它层析方法。
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=766260&sty=1&tpg=3&age=-1')
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发表于 2013-6-29 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
定购Amersham公司的产品，Amersham公司网上有表达、纯化手册（GST Gene Fusion System Handbook），文件有点大，你自己从网上下吧！

网址：cuturl('http://www1.amershambiosciences.com/aptrix/upp01077.nsf/content/china_homepage')，在“Search”框里输入“GST Gene Fusion System Handbook”，新网页打开后点击“GST Gene Fusion System Handbook”，第三个网页打开需要你注册，注册后即可下载操作手册了！

手册里面试剂定购及操作步骤很详细！
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idoww[使用道具]
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发表于 2013-6-29 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的蛋白表达,离心沉淀后,将培养液上清倒掉,将菌体沉淀用含尿素的变性缓冲液进行悬浮,充分作用后,再高速离心,,结果在上清中有我的蛋白
请问各位,这是否能说明我的蛋白就是分泌性蛋白呢？
我也没有采用超声裂解的方法来破碎细菌。
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2013-6-29 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
尿素是变性剂，也有可能造成细胞有破碎。建议用超声破碎后与你的这种方法做个对比，如果超声后的明显比这种方法含量高就不足以说明你的蛋白是分泌蛋白。
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