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标题:【求助】免疫沉淀沉淀不完全

yychen[使用道具]
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我做免疫共沉淀,沉淀HSP90发现沉淀很不完全。蛋白大部分还留在上清中,沉淀中的很少。我用的是RIPA裂解液,250ug总蛋白用了2ug抗体,加入抗体后在4度缓慢摇晃24h,后又加入珠子4度缓慢摇晃过夜。请问各位大侠问题在哪里?谢过了先!

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你好,我最近也要做免疫沉淀,请问铺板的时候贴壁细胞要铺多少密度的啊?实验过程中的蛋白用的比较多,我今天测了蛋白浓度都不够用。。。
还有用的一抗是不是与做western 的一抗不同啊?我做western 的一抗说明书上面应用范围里面没有提到可以用于做免疫沉淀。是不是得重新买可以做免疫沉淀的抗体啊?
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yychen[使用道具]
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谢谢!我明白了,下次用不含SDS的裂解液试试。是不是只要不含SDS就行啊?Triton和NP40都行吗?

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不可以用SDS裂解液的啊
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yychen[使用道具]
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我做免疫共沉淀,沉淀HSP90发现沉淀很不完全。蛋白大部分还留在上清中,沉淀中的很少。我用的是RIPA裂解液,250ug总蛋白用了2ug抗体,加入抗体后在4度缓慢摇晃24h,后又加入珠子4度缓慢摇晃过夜。请问各位大侠问题在哪里?谢过了先!

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一抗有多克隆和单克隆,有啥区别啊?
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