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标题:【求助】about TAP（蛋白相互作用）

u234[使用道具]
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发表于 2013-7-6 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您好！不知您的TAP载体购自哪家公司，国内有代理吗？我前一段时间做PULL DOWN找结合蛋白，结果很不理想。一年半时间了，一点进展没有，很急呀，估计得延期毕业了，希望得到您的指点！谢谢。
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发表于 2013-7-6 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 u234 于 2013-7-6 11:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
您好！不知您的TAP载体购自哪家公司，国内有代理吗？我前一段时间做PULL DOWN找结合蛋白，结果很不理想。一年半时间了，一点进展没有，很急呀，估计得延期毕业了，希望得到您的指点！谢谢。 ...

我不是我们实验室第一个做这个的，载体的来源我并不是很清楚，好像是国外试验室改造的，向别人要的。我这方面的实验也只刚开始，如前所说将进行完检测，后续纯化还没做，还没有更多经验可交流，希望有进展了能更多和大家交流。此外，你提到做Pull Down找结合蛋白，结果不理想，是否是原核体系中进行的呀？会否是相互作用依赖真核中特有的一些修饰呢?
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发表于 2013-7-6 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也说不清楚，老板现在很是生气！没办法，只好换其他方法试试啦。
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发表于 2013-7-6 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我不是我们实验室第一个做这个的，载体的来源我并不是很清楚，好像是国外试验室改造的，向别人要的。我这方面的实验也只刚开始，如前所说将进行完检测，后续纯化还没做，还没有更多经验可交流，希望有进展了能更多和大家交流。此外，你提到做Pull Down找结合蛋白，结果不理想，是否是原核体系中进行的呀？会否是相互作用依赖真核中特有的一些修饰呢?

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我也是打算用pull down来寻找相互作用的蛋白，请问，如果可能存在您所说的是在原核体系中进行，而且相互作用依赖真核中特有的一些修饰，有什么好的解决办法吗？
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u234[使用道具]
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发表于 2013-7-6 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果蛋白结合真的需要修饰的话，原核应用可能会受到限制的，我不知道其他更好的解决方法，请原谅！
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发表于 2013-7-6 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果蛋白结合真的需要修饰的话，原核应用可能会受到限制的，我不知道其他更好的解决方法，请原谅！

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不过还是谢谢你哟：）至少给我也提了个醒。那么请问你现在换用了其他的方法吗？
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发表于 2013-7-6 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有呀，想做免疫共沉淀抗体又没有，做双杂交老板又不舍得花钱，做TAP又没有买到载体，唉！我真不明白，做个实验咋这么难？条件不行，老板还总找你要data。
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发表于 2013-7-6 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 u234 于 2013-7-6 11:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

没有呀，想做免疫共沉淀抗体又没有，做双杂交老板又不舍得花钱，做TAP又没有买到载体，唉！我真不明白，做个实验咋这么难？条件不行，老板还总找你要data。 ...

同志！你咋跟偶是一样子的处境呀：（ 我现在也卡壳在这里了，郁闷呀）
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u234[使用道具]
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发表于 2013-7-6 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
唉，苦命的娃！如果5月实验室还没有弄到TAP系统，我准备从蛋白功能研究入手，总不能坐以待毙。有时间我们可以聊聊。
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发表于 2013-7-6 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也有个疑问想请教大家：按照冷泉港那本书上纯化磷酸多肽的方法，结合蛋白缓冲液是乙酸pH为2，会不会造成纯化出来的蛋白是不可逆的变性的？
我想得到有活性的蛋白。
另外还有的方法上还用到乙腈，是不是也会使蛋白变性？
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