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标题:【求助】about TAP（蛋白相互作用）

ququer787[使用道具]
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发表于 2013-7-6 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没有呀，想做免疫共沉淀抗体又没有，做双杂交老板又不舍得花钱，做TAP又没有买到载体，唉！我真不明白，做个实验咋这么难？条件不行，老板还总找你要data。

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做免疫共沉淀如果没有针对你蛋白的抗体，你可以构建带标签的真核表达载体，在细胞中过表达以后收取蛋白再进行免疫沉淀，当然这需要标签抗体，有商业化的抗体可以买，如果你的老板同意的话。此外，顺便问问你是什么专业？
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u234[使用道具]
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发表于 2013-7-6 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我当时也考虑过，但是我不知道这样做结果是否可靠，文章档次是否受影响？另外，您是否见过这种方法的文章，我倒觉得TAP原理也是这样的。我是生化与分子生物学专业，方向是蛋白质化学，你呢？
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发表于 2013-7-6 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 u234 于 2013-7-6 11:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我当时也考虑过，但是我不知道这样做结果是否可靠，文章档次是否受影响？另外，您是否见过这种方法的文章，我倒觉得TAP原理也是这样的。我是生化与分子生物学专业，方向是蛋白质化学，你呢？ ...


在验证蛋白相互作用时用细胞或组织内源性表达的蛋白当然是最说明问题的,但需要针对蛋白的特异性抗体，这并不是总能满足的条件。现在文章里用标签抗体做这方面实验的应该还是很多见的，JBC或JCB等杂志都可以见到，不知你要求发何种水平的文章？
再者TAP实际上也是标签，并且还比较大，它的可信度增加更多是因为经过了两步纯化去除了一些杂蛋白的污染。并且这种方法更适合进行一定规模的，筛查某一目的蛋白的相互作用蛋白，而对于只是想检测某两蛋白间相互作用并非最佳方案，因为最后纯化所的的样品分离后进行质谱鉴定，我认为找到你感兴趣蛋白的几率并非100％，甚至还要低。检测不到并不能说就没有相互作用，犹如撒网捞鱼，没捞着并不代表没有。这时用抗体是更有针对性的，而且更高效。可以用标签抗体先做，同时尽量寻找蛋白的特异抗体，从公司购买或自己制备，另外现在有的公司你只要告诉他你的蛋白序列，他可以帮你分析抗原表位，合成肽段制备抗体，一般来说效果还是可以的，不妨从这方面也想想办法。祝你顺利！
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any333[使用道具]
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发表于 2013-7-6 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
终于找到家了
偶也在设计TAP实验哦, 大家一起交流!
偶准备用多种载体试一试, 手头构建好的TAP载体有3个. 载体应该问题不太, 但做每种载体时的工作量好象很大的,需要的细胞非常多,大家要有心里准备(10 T-175 flasks/TAP vector)
我也是命苦,前面有几个人做过双杂但不知是该基因对酵母有毒性还是其他什么原因,做这个实验酵母总长不起来.所没只有想别的办法.
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DNA[使用道具]
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发表于 2013-7-6 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位的见解，发现研究蛋白质相互作用的方法还是挺多的，不过都有局限性，我现在正在做一考题，

在某种疾病的患者中发现某蛋白的表达水平显著地变化，如何通过蛋白质相互作用研究此蛋白在此疾病的发病过程中的分子机制？举出至少五种方法（实验和生物信息学均可），画一个流程图来说明，并简述你列出的每种方法的研究目的和优缺点。本人对这方面不是很了解，希望各位可以慷慨解囊，谢谢！
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