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标题:从维生素E检测到HPLC分析的新思路

eedc-dcnge[使用道具]
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发表于 2010-1-19 11:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从维生素E检测到HPLC分析的新思路

　　从维生素E检测到HPLC分析的新思路

　　此文分为四个部分：

　　一、 维生素E检测的两种方法

　　二、 两种方法的优缺点

　　三、 HPLC分析新思路

　　四、 总结

　　一、 维生素E检测的两种方法

　　目前，国内国际检测维生素E不外乎两种方法，而前一种方法为通用方法，下面简要的介绍一下这两种方法。

　　1. 皂化-HPLC法

　　试样皂化后，经有机相萃取，维生素E用HPLC分离，外标法定量。根据样品的不同，皂化处理以去除干扰，同时在处理的过程中要加入保护剂。皂化反应碱的浓度、用量、皂化反应的温度，因样品的不同而略微有变化。具体处理步骤可参见国标，此处就不在赘言。

　　2. 萃取-HPLC分流法

　　试样直接萃取，萃取液过滤后准备进样。此法HPLC的配置和传统的配置不一样，具体的配置方式是：配备两台高压泵、两个六通阀、两根柱子(一根为分析柱、另外一根为预柱，其组分与分析柱相同)。HPLC分析开始的时候，泵一、预柱、分析柱、检测器连接在一起(Figure 1，红线)。泵二直接排空(Figure 1，蓝线)

　　

　　Figure 1 阀切换前

　　当分析的样品通过预柱后，左边的阀切换，此时泵一、预柱连接，然后排空(Figure 2，蓝线);泵二、分析柱、检测器连接在一起(Figure 2，红线)。分析完成后，HPLC自动切换到Figure 1的状态。

　　

　　Figure2 阀切换后

　　二、 两种方法的优缺点

　　1. 皂化-HPLC法

　　此法为国标方法，不管是婴幼儿奶粉还是复合预混料都是用的此方法。优点是通用性强，不管是哪种形态的维生素E都会皂化为同一种形态定量，针对的样品广泛，适合用于通用的检测方法(国标、行标等)。

　　缺点是皂化的“度”不好掌握，造成稳定性不是很好。而且维生素是有生物活性的组分，统一皂化后虽然能定量，但是不能反应形态组分的生物活性，对于实际生物效果的反映欠佳。拿维生素E举例而言，不同的形态组分其生物活性相差非常之大，皂化后定量是化学方面的，而不能反映出生物活性方面的“量”。

　　2. 萃取-HPLC分流法

　　此法为专属的方法，优点是不需要皂化，直接萃取，稳定性良好，而且能够直接测定维生素E的不同形态组分，完美的反映了最终的生物活性“量”。加之前处理过程简单，有效的节约了试剂和时间。

　　当然缺点也非常明显，其一是HPLC的配置复杂;其二是专属性强。专属性在此处有两个方面，一是针对不同的样品其萃取的试剂、过程不一样，相差非常大;二是标准物质定量的时候因为有不同的维生素E的组分，需要不同形态的维生素E标准品，造成了标准品的繁复。

　　三、 HPLC分析新思路

　　此部分讨论一下方法二所体现出来的亮点。方法二前处理简单，几乎没有对样品进行多少纯化方面的处理，而这样“脏”的样品通过在HPLC上面的处理，达到了完美的纯化和分离的效果。

　　为了实现在HPLC上面纯化和分离，此法的HPLC多了一台泵、一个六通阀，当待检组分(维生素E)通过预柱后，阀一自动切换，此时泵一直接冲洗预柱，样品中“脏”的部分都保留在预柱上面。当待测组分在分析柱上面分离的时候，预柱被很好的冲洗干净。

　　此法和传统的HPLC法不一样之处在于，传统的HPLC方法都是增多前处理的步骤，尽量纯化样品，使得上机的样品干净，便于保护分析柱和保证分离的效果;此法是背道而行，前处理的步骤非常之简单，纯化样品的步骤放到HPLC上面进行，既节约了样品前处理的步骤和时间，又保证了分离的效果。在样品分离的时候同时进行预柱的清洗，节约了时间。

　　四、 总结

　　当我们对于微量组分进行分析的时候，往往因为前处理步骤的繁多而造成了检测的困难，回收率低下、稳定性差，此时我们可以考虑本文所述的方法二——直接简化前处理的步骤，在仪器上面实现样品的纯化!

　　绝大多数时候，我们的样品因为“脏”而需要复杂的前处理步骤，此文介绍的方法能够有效的解决这一问题。当然，对于方法二也可以“背道而行”一下，同样的配置，文中举例是因为待测组分的保留弱于杂质，而某些样品或组分刚好反过来，待测组分的保留强于杂质，此时可以先冲洗杂质，然后阀切换分析待测组分。

　　END

[ 本帖最后由 eedc-dcnge 于 2010-1-19 11:47 编辑 ]
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  • naren4545   2010-1-19 18:31  可用分  +3   很好的资料！
  • naren4545   2010-1-19 18:31  专家分  +2   很好的资料！
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发表于 2010-1-19 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢分享！很不错的。
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gshaojun0823gs[使用道具]
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发表于 2010-1-19 13:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好好看一下，以后用的着。。
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haohaorenjia[使用道具]
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发表于 2010-1-19 14:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很不错，谢谢分享！
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发表于 2010-1-19 14:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很好的创新思路！学到了。
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发表于 2010-1-19 14:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢楼主分享！这个资料很全面！很实用！
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发表于 2010-1-19 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
资料很详细，感谢楼主！！
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发表于 2010-1-20 10:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不错哦！很好的创新！！
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发表于 2010-1-21 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很好的思路，看来楼主是个善于总结的人。
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发表于 2016-2-26 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用处不大

维生素E分析中皂化的目的更多的是让维生素E和脂肪分离，如果是添加的合成维生素E，无需皂化直接检测即可也根本无需两个六通阀两跳柱子，一般分离起来不难；如果是天然维生素E，不皂化，嘿嘿，你检测出来结果会是0
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