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标题:【讨论帖】朊病毒

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Science, 2003, May 9, Vol 300:917~919


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相关疾病:
感染疾病
果然难读。鼓起勇气基本读完,理了一个大概。写得相当好,值得读。
构象转变不能脱离细胞来研究,但conformation的研究目前仅仅在细胞外或体外水平,在这个层次的研究进展十分有限
prion所致的相关疾病到底是遗传性疾病还是感染性疾病?如果是后者如何传播?
基因敲出小鼠Prnp0/0表现出对prion所致的相关疾病具有抵抗性,更重要的是,它们的表型和生理功能无明显异常,这个实验结果是对prion学说的最大挑战,有人又回到了“病毒病原”的思考
抗体的产生:Prnpc和PrnPsc的conformation差异没有表现在抗体上,即单抗无法识别区分二者,免疫机制是什么?
PrnPsc的的高级结构还在不断修正,取决于方法学进展
越来越多的yeast prion研究引起了对prion的新看法。
如果prion假说不成立,那么prion只是等待我们去研究的人体数十万蛋白中的一种,它是否可能参与信号转导、参与酶催化?目前的研究进展还不大。
prion可能是其他分子作用的地物或对象,因此许多科学家在寻找。
prion的神经损伤机制和治疗、诊断。但是由于基础研究差得很远,所以这些方面的进展我没有细看。
作者认为还有五个难题:
复制如何进行的,构象转变的机制怎样,能否抑制这个过程?
如何介定 prion的本质?归于病毒,但其和病毒的许多特征并不相符
prion 如何到达大脑,有那些分子参与,能够阻止它进入大脑吗?
神经病理机制是什么?
Prnpc的功能是什么?
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是的,这些应该算是朊病毒研究的最新进展了,还有很多问题没有解决。到现在为止我们还不能说,朊病毒是可以自己复制自己的蛋白质,它还只是一

种假说。
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Science Mar 5 2004: 1514-1516


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最新的一篇文章:

致病性朊病毒蛋白必须与正常朊病毒蛋白同时存在才可致病,故

Hypothesis:正常朊病毒蛋白也参与了致病中枢神经的过程

基本方法:将单抗与正常朊病毒蛋白做 crosslink,打入C57BL/10 鼠的海马内,免疫组化,荧光染色,观察组织变化。
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我这又一张prpC转变为prpSc的图片,和大家分享!


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"Prion是一分子量为33kD~ 35kD的糖蛋白,Prion蛋白(prion protein,Prp)由 254个氨基酸组成(人类Prp为253个氨基酸)。研究发现,Prp存在异构体,既Prpc和Prpsc。Prpc是存在于正常组织的功能还不清楚的糖蛋白,对蛋白酶敏感,不致病,Prpsc分子量为27kD一30kD,对蛋白酶有抗性,是可致病蛋白质。"
這樣說是不太準確的,由于prpc和prpsc的一級結搆是完全一樣的,所以它們的分子量也應該是一緻的
prp27-30的産生是由于prpsc隻是部分地抗蛋白酶K的消化 其N耑的柔軟捲麯(prp23-90)被降解后産生的大約142個aa殘基就是prp27-30

Prions
STANLEY B. PRUSINER†
Departments of Neurology and of Biochemistry and Biophysics, University of California, San Francisco, CA 94143


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现在有很多针对PrP的抗体是不能区分两种不同的PrP(PrPC和 PrPSc)的,我手头看到的一篇文章说单抗15B3可以特异性识别PrPSc(Korth C, Stierli B, Streit P, Moser M, Schaller O, Fischer R, Schulz-Schaeffer W, Kretzschmar H, Raeber A, Braun U, Ehrensperger F, Hornemann S, Glockshuber R, Riek R, Billeter M, Wuthrich K, Oesch B. Prion (PrPSc)-specific epitope defined by a monoclonal antibody. Nature, 1997, 390(6655): 74-77)。
要判断是PrPC还是 PrPSc,其实可以利用PrPC和 PrPSc对PK(蛋白酶K)的不同抗性来区别,PrPC是不能抵抗PK的消化的,而PrPSc则可以部分抵抗,再利用抗PrP抗体来捕捉,判断是否有留下的PrP片断就可以知道是PrPC还是 PrPSc了。

=========================================================================================================

Antibody to DNA detects scrapie but not normal prion protein
Communicated by Lynn T. Landmesser, Case Western Reserve University, Cleveland, OH, November 25, 2003 (received for review June 10, 2003)

A conformational change is
believed to convert the normal cellular prion protein into PrPSc.
Detection of PrPSc for diagnosis and prophylaxis is impaired because
available Abs recognizing epitopes on PrP fail to distinguish
between PrPSc and normal cellular prion protein. Here, we report
that an anti-DNA Ab, OCD4, as well as gene 5 protein, a well
established DNA-binding protein, capture PrP from brains affected
by prion diseases in both humans and animals but not from
unaffected controls. OCD4 appears to immunoreact with DNA (or
a DNA-associated molecule) that forms a conformation-dependent
complex with PrP in prion diseases. Whereas PrP immunocaptured
by OCD4 is largely protease-resistant, a fraction of it remains
protease-sensitive. Moreover, OCD4 detects disease-associated PrP
>10 times more efficiently than a widely used Ab to PrP. Our
finding that anti-DNA Abs and gene 5 protein specifically target
disease-associated DNA–PrP complexes in a wide variety of species
and disease phenotypes opens new avenues in the study and
diagnosis of prion diseases.


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不同抗體識別位點


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“人PRNP的突变常发生在第32、48、56、72位密码子处,多为重复片段的插入或点突变,突变的结果是使Prpc分子转变成Prpsc”

這些是prp八肽重復區的突變 一般認為它們會影響prp跟Cu2+的結閤
而在prp的緻密domain區域 有很多點突變跟傢族性的prion疾病相關
這些點突變被認為直接影響暸prpc到prpsc的conversion
所以 研究遺傳性點突變蛋白是研究prp蛋白性質的一個非常重要的手段


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