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标题:[未解决]求助：上样量为20ul时跑电泳却降解了，目的带非常弱？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
fancy077[使用道具]
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发表于 2010-1-29 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

求助：上样量为20ul时跑电泳却降解了，目的带非常弱？

DNA跑胶2ul有目的带很清晰，但是胶回收时，上样量为20ul时跑电泳却降解了，目的带非常弱，而且胶回收后跑电泳什么也没有了，我的目的带大于20Kbp。请各位帮忙分析一下了 多谢多谢
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aa1380[使用道具]
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发表于 2010-1-29 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胶回收DNA？没看懂，你回收什么啊，PCR产物？
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fancy077[使用道具]
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发表于 2010-1-29 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
就是从细胞里提取的基因组DNA,上样量2ul时检测，有清晰地大于20Kbp的条带。但是准备胶回收纯化时，上样量20ul时却大部分被降解了，目的条带很微弱。然后就把这微弱的胶切去回收吧，结果在跑电泳什么也没有了。现在问题是，为什么跑大孔时会降解呢？
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发表于 2010-1-29 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
20k？好像超出了普通胶回收试剂盒的回收范围了。找回收大片段的盒子吧。

电泳没条带，可能是没回收到，不是降解了。
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fancy077[使用道具]
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发表于 2010-1-29 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不对啊，回收前检测的确提取到了所需要的DNA（就一条明显的大于20Kbp的条带）,只是一去跑胶回收凝胶（大孔），未切胶时却发现目的带量很少，而下方却有一条非常粗的DNA条带（大概小于2000bp）
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rjzhang0110[使用道具]
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发表于 2010-1-29 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你胶回收的目的是做什么的，如果做PCR就不用回收
你回收不到可能是由于片段过大，不利于胶回收
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bergkamp88[使用道具]
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发表于 2010-2-3 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼上交流，我来学习下。。
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