小中大谢谢，谢谢
那复制子是从ORI开始到什么结束？
以上面的多顺反子为例
阅读框就是：“启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子---RBS--目的基因2---终止密码子---RBS--- ---目的基因3--终止密码子---polyA”
ORF就是：启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子
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这里楼上的理解可能有个非常严重的错误，ORF不应该包括启动子、操纵子、RBS；启动子之后的序列可能称为转录框比较合适，转录子发生剪切之后才形成阅读框编码的蛋白质。
另外，“RBS--目的基因1---终止密码子---RBS--目的基因2---终止密码子---RBS--- ---目的基因3--终止密码子”模式似乎也不应适用于原核生物，尤其是作者提到顺反子（顺反子是不是只能用于原核生物的概念？），个人理解是否应该是RBS序列不需要反复出现？而用于原核表达的话，甚至是不应该携带？因为基因来源的细菌是到另一个宿主表达，转而应该用宿主的识别表达系统而非原来的识别表达系统？
举例来说，目标基因：“RBS--P启动子--起始密码子--目的基因1---终止密码子---间隔序列1--起始密码子--目的基因2---终止密码子---间隔序列2--起始密码子--目的基因3---终止密码子”，如果我要做目标基因1，2，3的表达供研究之用，那么我是否只需直接克隆“---起始密码子--目的基因1---终止密码子---间隔序列1--起始密码子--目的基因2---终止密码子---间隔序列2--起始密码子--目的基因3---终止密码子”，然后连接到载体导入宿主菌表达就OK了？因为载体上应该携带表达所需的附件“RBS--P启动子--”？
需要说明的是间隔序列可以是RBS也可以不是？因为我看到过间隔序列只有一个碱基的！
以上观点仅供讨论，谢谢你们的讨论，收益良多，欢迎继续交流探讨。
