蛋白质与蛋白组学

我遇到了相同的问题，用EK酶切有严重的非特异性条带出现。融合蛋白20K，标签17K，目的肽段3K，EK过夜切后有17K和14K两条带出现，20K处的条带完全消失。不明白这是怎么回事。

蛋白之安基兄提到EK可以错误切割thrombin位点，可有相关的文献依据？怎样避免类似的错误切割呢？

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这位兄弟的情况应该是切过了，可以缩短酶切时间试试，当20K的融合蛋白只剩下10%或者更少，而不是被完全切没才是恰到好处的，这样的话相信会减少很多14K条带的出现。