蛋白质与蛋白组学

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用ellman法测定蛋白质中的二硫键，我几乎没有测成功过，不知道问题出在 哪里，中英文文献都看过，还是不成功，求助大师们

我也做过蛋白质中二硫键的测定，成功了倒是没问题，就是不会计算，算不出二硫键到底有多少，楼主看看中文吧，有的还是比较详细的。。

3.2.3.10 巯基含量测定
巯基含量测定采用经Beveridge[3]改进后的Elman法[4]，稍作改动。主要配制试剂配置及测试方法如下：
A、Tris-Gly 缓冲液（pH8.0）：精确称取10.418 g Tris， 6.756 g 甘氨酸， 1.489 gEDTA二钠，加去离子水定容至1000 mL。
B、Tris-Gly-8M Urea溶液：在Tris-Gly缓冲液中加入480.48 g尿素。
C、DTNB溶液（4 mg/mL）：4 mgDTNB试剂溶于1 mLTris-Gly缓冲液（A）。
总巯基和暴露巯基含量测定：添加15 mg大豆蛋白至5 mL测试溶液中（A用作暴露巯基含量的测试液，B用作总巯基含量的测试液），添加50 μL C溶液，在25 ℃保温1 h后，于25 ℃离心（13,600 g10min），上清液在412 nm比色。巯基含量的计算公式如下:
SH（μmol/g）=73.53×A412×D/C式中：
A412---除去试剂空白后样品的吸光光度值
D---稀释倍数
C---蛋白含量

袁德保----大豆蛋白热聚集行为及其机理研究；华南理工大学博士论文；2010. page49.你看看行不行。

总巯基会上升，则表明此法还未完全测得所需要的巯基）。4L的改进我也看过，大家应用此法的时候，都应该针对自己的样品做出改进。 最好从原理着手，一味的照搬恐怕不行了。 据我查阅文献，此法显色剂以及显色条件都有在拓展（针对不同蛋白质）和改进。

用公式呗，先测未还原二硫键前的总巯基，后测还原后的总巯基，
（后者-前者）/2 即为二硫键的量。 注意实验时 显色液较加样量稀释倍数(D值)，以及进入显色剂前样品蛋白质浓度(C mg/ml).
公式 SH=73.53*A412*D/C  (单位：umol/g protein)