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推荐一个极为优秀的配方:
染色液:考马斯亮蓝R-250 1g,乙醇45%,冰乙酸 10%,加水定容至1000ml。
脱色液:冰乙酸10%,乙醇30%。
我们是实验室每天五台电泳仪做SDS-PAGE,都是用的这个配方,人格担保绝对好用。没有甲醇,减少毒性,效果一样好。
加入染色液100ml,加盖微波煮沸,振摇染色2-3min,回收染色液,自来水漂洗,加脱色液50-100ml,脱色10-20min,观察。整个过程绝对不超过40min,过夜染色真没必要。我用500ml的染色液,每次用完回收,可以用几十次上百次,最后有机溶剂挥发光了,染完色,胶变的很大,就要重配了。配制好的染色液可以存放很长时间,想等它坏掉不知要几年时间。
10KD以下的蛋白条带都是弥散的。需要看小分子量可以用trisin胶。
电泳液按照分子克隆配制,时间久了胶上会有背景。哈哈,有一次我曾经误用稀释10倍的电泳液,条带会走的慢些,不过效果还是不错,10KD的条带在12%的胶上都能看到。