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标题:【讨论帖】Tricine-SDS-PAGE胶的使用方法与心得

skytree[使用道具]
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Tricine:三羟甲基甲基甘氨酸
分子式:C6H13NO5
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2013-7-31 13:12
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nvdabing[使用道具]
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对于这个错误给大家道歉!
我的整个体系是从师姐的实验记录本中摘抄下来的,有了出入,我已查阅相关文献,证实版主skykiller是对的。
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taoshengyijiu[使用道具]
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昨天做了tricine SDS_PAGE,没有AB-3,就用的Bio-Rad的30%的stock solutions,调整了一下用量.
Anode buffer: 0.2 M Tris-HCl, pH8.9
Cathode buffer: 0.1 M Tris, 0.1 M Tricine, 0.1% SDS, pH8.25
Gel buffer: 3.0 M Tris, 0.3% SDS, pH 8.45
Electrophoresis: 80V 30min, 200V 60min.
结果小分子量的条带很弥散,不只是什么原因?请楼主和高手指点迷津。图片做的不好,让大家见笑了。谢谢!
   10% 分离胶   4% 积层胶
DDH2O   2.3 ml   3.36 ml
Gel buffer   3.3 ml   1.2 ml
AB ( 30% stock)   3.34 ml   0.67 ml
Glycerol(100%)   1 ml   0 ml
10% APS   50 μl   40 μl
TEMED   6 ul   5 ul
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nvdabing[使用道具]
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第四道似乎漏了。
小分子量的条带本身就会弥散。
你仔细观察就会发现,分子量越大条带越细,分子量越小越弥散,表现出的就是条带很粗。
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阿凡提[使用道具]
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你的甘油是纯的?会不会很难吸起来啊!这样会不会不准,能问下你的丙烯酰胺是百分之几的啊!你的浓缩胶和分离胶Gel-Buffer的PH值是一样的啊?
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eric930[使用道具]
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LZ,按照你的配方,我制的浓缩胶根本不凝固,电泳完了,转膜时发现浓缩胶就跟浆糊似的,什么情况呢?你的配方没问题吧?
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nvdabing[使用道具]
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浓缩胶不凝 是不是AP不行啊 AP粉剂很容易吸潮 时间久了就失效了 还有温度低了会影响凝固的
可以把10%AP和TEMED的量加大 会凝的快些
上面的配方是按我实验记录本录上来的
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nvdabing[使用道具]
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还有 至于版主的留言问题
我想说的是 只有负极缓冲液用了tricine
我一直用的是上面的配方 tris-base 和tris-HCl都写的很清楚 没有错的
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