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标题:【求助】原核表达的奇怪现象--关于终止密码子的效率

芙蓉宫主[使用道具]
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发表于 2013-8-1 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

诱导一般就是IPTG常规诱导，不过你要摸索一下条件，时间，IPTG浓度，诱导温度，甚至AMP的浓度。 你说的洗脱是指NI柱吗，同样要摸索一下，先用常规的方法，然后根据电泳图改变咪唑浓度。祝好运！
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2013-8-1 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的一个蛋白用的也是TGA终止的，测序正确，但表达出来的蛋白分子量也偏大，不知道会不会是通读了，但是我的蛋白没有后面的HIS标签，不能肯定是不是通读了。
看到有些帖子说到蛋白电泳的表观分子量和实际分子量可能有区别，所以不能很肯定是否通读
这里还有个疑问：通读的话一般会在哪里停止呢？我蛋白设计的那个终止子越过后，还有两个不同位置的终止子，前一个的话，分子量还是小，后一个终止的话，蛋白分子量倒差不多。
敬请lz，各位指教
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yes4[使用道具]
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发表于 2013-8-1 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

俺从开始就被人告知，终止密码子是三套一块上的，从没出过问题。显得有点笨，但是省得麻烦很多。
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