小中大这个主题开的好,一下学到很多,补充点我们的做法:
试剂准备:我们把APS每0.1g分装在干净的EP管里,临用的时候加1ml水轻轻混匀就可以用了,非常方便,连续使用就放在4°,暂时不做这液体可以冻在-20°,一个月之内问题不大。电泳缓冲液我们也是10X的,转膜缓冲液是2X的,效果很好,一两个月之类都不用调整pH值。WB一抗很重要,我们使用过的santa、abcam、CST、millipore的效价都比较高,用起来反而节约并且放心,其中磷酸化抗体CST的最全,可惜每支抗体量有点少。
做胶:上胶条的时候一定要用梳子将两个底脚刮好,底边不够直问题不大。灌胶有一点点气泡直接用针头挑破就可以了。天冷的是后把胶放在37°温箱,可以节省不少时间。
其它:胶片的确是事先裁好比较好,我们的经验是用干净的裁刀,就是那种杂志什么修边用的一个板子侧面有铡刀。一次可以裁好N张胶片,省时。装在套elisa板子的那种袋子里,外面在罩上密封的文件袋,很安全。暗室里一摸出来就能夹在夹子里曝光。